BAB I - UNAIR REPOSITORY

ADLN Perpustakaan Universitas Airlangga

SKRIPSI

DAYA HAMBAT MINIMUM EKSTRAK DAUN JAMBU BIJI (Psidium guajava linn) TERHADAP PERTUMBUHAN STREPTOCOCCUS VIRIDANS (Eksperimental Laboratoris)

Oleh : REZA AL FESSI 020413346

FAKULTAS KEDOKTERAN GIGI UNIVERSITAS AIRLANGGA SURABAYA 2009

LEMBAR PENGESAHAN

skripsi

Daya Hambat Minimum Ekstrak Daun ...

Reza Al fessi


DAYA HAMBAT MINIMUM EKSTRAK DAUN JAMBU BIJI (Psidium guajava linn) TERHADAP PERTUMBUHAN STREPTOCOCCUS VIRIDANS

SKRIPSI

Diajukan sebagai salah satu syarat untuk menyelesaikan Pendidikan Dokter Gigi pada Fakultas Kedokteran Gigi Universitas Airlangga

Oleh: REZA AL FESSI 020413346

Mengetahui / menyetujui

Pembimbing I

Pembimbing II

Ira Widjiastuti, drg, M. Kes. SpKG

Achmad Sudirman, drg. MS. SpKG

NIP. 131 801 635

NIP. 130 701 110

FAKULTAS KEDOKTERAN GIGI UNIVERSITAS AIRLANGGA SURABAYA 2009 KATA PENGANTAR

skripsi


Reza Al fessi


Puji syukur penulis panjatkan kehadirat Allah SWT atas segala anugerah dan hidayah-Nya yang telah diberikan kepada penulis, sehingga penulis dapat menyelesaikan skripsi dengan judul ”Daya Hambat Minimum Ekstrak Daun Jambu Biji (Psidium guajava linn) terhadap Pertumbuhan Streptococcus viridans” Penulisan skripsi ini diajukan sebagai salah satu syarat untuk menyelesaikan Pendidikan Dokter Gigi di Fakultas Kedokteran Gigi, Universitas Airlangga, Surabaya. Dalam penulisan skripsi ini, penulis telah banyak mendapat bantuan, bimbingan masukan dan dukungan dari berbagai pihak baik secara langsung maupun tidak langsung yang telah turut membantu hingga terselesaikannya skripsi ini. Untuk itu dalam kesempatan ini penulis ingin menyampaikan terimakasih yang sebesar-besarnya, kepada: 1. God Almighty, yang telah memberiku kehidupan, kesehatan dan pikiran yang jernih untuk menjalani seluruh aktivitas sehari-hari. 2. Prof. Dr. Roeslan Effendy, drg., MS., SpKG (K), selaku Dekan Fakultas Kedokteran Gigi, Universitas Airlangga. 3. Dr. Adioro Soetojo, drg., MS., SpKG (K), selaku Ketua Departemen Ilmu Konservasi Gigi. 4. Ira Widjiastuti, drg., MKes., SpKG (K), selaku Dosen Pembimbing I, yang dengan penuh kesabaran dan kebijaksanaannya telah meluangkan waktu guna membimbing, membantu, memberikan ilmu, arahan dan dorongan dalam penyusunan skripsi ini sehingga penulisan skripsi ini dapat terselesaikan dengan baik.

skripsi


Reza Al fessi


5. Achmad Sudirman, drg., MS, SpKG (K) selaku Dosen Pembimbing II, yang telah meluangkan waktu dan kesediaannya memberikan bimbingan, dorongan, ilmu, saran dan arahan dalam penyusunan skripsi ini. 6. Karlina Samadi, drg., MS., SpKG (K); Ari Subiyanto , drg., MKes., SpKG (K); Nanik Zubaidah, drg., SpKG (K). selaku dosen penguji yang telah benyak memberikan saran, ilmu serta arahan hingga terselesaikannya skripsi ini. 7. Seluruh staf dan karyawan di Departemen Ilmu Konservasi Gigi Fakultas Kedokteran Gigi Universitas Airlangga Surabaya yang telah memberikan bantuan dan dorongan semangat, sehingga penulisan skripsi ini dapat terselesaikan. 8. Markus Budi Rahardjo, drg., MKes selaku Dosen Wali yang telah memberikan dorongan dan semangat, sehingga penulis termotivasi untuk segera menyelesaikan skripsi ini. 9. Bapak dan Ibu tercinta. Susalam dan Nanik Baktia, Adikku tercinta Ifa dan Rona serta Seluruh keluarga besar Soeratman dan alm. Sulasih terima kasih atas segala curahan kasih sayangnya yang tiada henti, semangat, dukungan, motivasi, dan doanya yang ikhlas sehingga penyusunan skripsi ini dapat berjalan lancar dan sukses. Kalian orang terbaik dan paling berarti dalam hidupku. 10. My lovely soulmate, Anggaraningsih Widyawati Deca Caesarina, dengan kesabaran, ketelatenan, kesetiaan, perhatian, pengertian, kasih sayang dan semuanya yang telah banyak memberi bantuan, semangat, doa, ide, tempat

skripsi


Reza Al fessi


saling berbagi keceriaan dan duka dan banyak memberi arti dalam menjalani hidupku. 11. Aria Agustina atas bantuan pikiran, daun jambu biji dari malang dan bantuan psikologi sehingga skripsi ini dapat selesai. 12. Taufan Bramantyo, drg terima kasih atas bantuan pengolahan data dan bimbingan statistiknya. 13. Dr. Indah Listiana K, drg., Mkes, Tuti Kusumaningsih, drg., Mkes, Sidarningsih, drg., Mkes, dosen pengajar Biologi Oral di FKG Unair, terimakasih atas bantuan konsultasinya. 14. Pak Jarwo Staf Fitokimia Farmasi Unair, Mas Eta dan Mbak Nur Staf Lab Mikrobiologi FKG Unair yang memberi bimbingan dalam pengerjaan penelitian. 15. Teman-teman seprofesi mahasiswa, Dharma, Muin, Arya, Ichrom, Gilang, mbak Bertha, dan angkatan 2004 juga Eden Band Manyar Kertoarjo 3/93 serta kawan-kawan yang sudah banyak sekali memberikan bantuan dalam segala hal motivasi, pikiran dan banyak lagi yang tidak dapat disebutkan Semoga Allah SWT membalas segala kebaikan dengan yang lebih baik kepada semua atas segala dukungan yang diberikan. Penulis menyadari bahwa dalam penulisan skripsi ini banyak sekali kekurangannya dan jauh dari kriteria sempurna. Oleh karenanya, penulis akan sangat berterima kasih apabila ada saran dan kritik yang sifatnya memperbaiki atau membangun untuk menjadi lebih sempurna, dan mohon maaf apabila dalam penulisan skripsi ini ada hal-hal yang tidak berkenan dihati pembaca. Terima kasih dan Allah SWT bersama kita.

skripsi


Reza Al fessi


Surabaya, Februari 2009

Penulis DAFTAR ISI

LEMBAR PENGESAHAN .......................................................................................i KATA PENGANTAR ...............................................................................................ii DAFTAR ISI..............................................................................................................v DAFTAR GAMBAR .................................................................................................viii DAFTAR TABEL......................................................................................................ix BAB 1 PENDAHULUAN 1.1 Latar Belakang Masalah...........................................................................1 1.2 Rumusan Masalah ....................................................................................4 1.3 Tujuan Penelitian .....................................................................................4 1.4 Manfaat Penelitian ...................................................................................4 BAB 2 TINJAUAN PUSTAKA 2.1 Perawatan Saluran Akar 2.1.1 Definisi..................................................................................................5 2.1.2 Preparasi................................................................................................5 2.1.3 Irigasi Saluran Akar ..............................................................................6 2.2 Mikrobiologi Saluran Akar ......................................................................6

skripsi


Reza Al fessi


2.3 Sterptococcus Viridans ............................................................................7 2.4 Anti Bakteri..............................................................................................8 2.5 Tanaman Jambu Biji 2.5.1 Klasifikasi .............................................................................................9 2.5.2 Sinonim .................................................................................................10 2.5.3 Uraian Tanaman ....................................................................................10 2.5.4 Karakteristik Tumbuhan Jambu Biji .....................................................11 2.5.5 Khasisat Daun Jambu Biji.....................................................................12 2.5.6 Kandungan Kimia .................................................................................12 2.5.7 Efek Ekstrak Daun Jambu Biji terhadap Pertumbuhan Bakteri ............17 2.6 Metode Identifikasi Bakteri secara In Vitro.............................................18 2.7 Metode Penentuan Kepekaan Kuman terhadap Bahan Antimikroba 2.7.1 Metode Penipisan Lempeng Agar.........................................................19 2.7.2 Metode Difusi .......................................................................................20 BAB 3 KERANGKA KONSEPTUAL DAN HIPOTESIS 3.1 Kerangka Konseptual Penelitian ..............................................................21 3.2 Hipotesis...................................................................................................22 BAB 4 METODE PENELITIAN 4.1 Jenis Penelitian.........................................................................................23 4.2 Rancangan Penelitian ...............................................................................23 4.3 Unit Eksperimental...................................................................................23 4.3.1 Sampel Penelitian..................................................................................23 4.3.2 Tehnik Pengambilan Sampel.................................................................23 4.3.3 Besar Sampel.........................................................................................23

skripsi


Reza Al fessi


4.4 Variabel Penelitian ...................................................................................24 4.5 Definisi Operasional ................................................................................24

4.6 Bahan dan Alat Penelitian 4.6.1 Bahan Penelitian ...................................................................................25 4.6.2 Alat Penelitian.......................................................................................25 4.7 Lokasi Penelitian......................................................................................26 4.8 Cara Kerja 4.8.1 Sterilisasi Alat dan Bahan yang Akan Digunakan ................................26 4.8.2 Pembuatan Ekstrak Daun Jambu Biji....................................................26 4.8.3 Persiapan Pengukuran Konsentrasi Hambat Minimum Larutan Ekstrak Jambu

Biji

terhadap

Streptococcus

viridans.........................................27 4.8.4 Persiapan Kultur S. Viridans .................................................................28 4.8.5 Metode Uji Kepekaan S.viridans terhadap Ekstrak Daun Jambu BijI ..28 4.9 Identifikasi Bakteri...................................................................................30 4.10 Prosedur Penelitian ................................................................................31 BAB 5 HASIL PENELITIAN DAN ANALISA DATA ...........................................32 BAB 6 PEMBAHASAN ............................................................................................34 BAB 7 KESIMPULAN DAN SARAN 7.1 Kesimpulan ..............................................................................................37 7.2 Saran.........................................................................................................37 DAFTAR PUSTAKA ................................................................................................38

skripsi


Reza Al fessi


LAMPIRAN...............................................................................................................42

skripsi


Reza Al fessi


DAFTAR GAMBAR

Gambar 2.1 Daun jambu biji (psidium guajava) ..........................................11 Gambar 3.1 Bagan kerangka konseptual penelitian .....................................21 Gambar 4.1 Serbuk daun jambu biji disaring dalam corong Buchner lalu diuapkan dari etanol dengan rotary eveporator untuk mendapatkan ekstrak kental ......................................................27 Gambar 4.2Ekstrak daun jambu biji terhadap pertumbuhan Streptococcus viridans pada konsentrasi 50%, 25%, 12,5%, 6,25%, 3,12%, 1,6% pada media BHIB.............................................................29 Gambar 4.3 Ekstrak daun jambu biji terhadap prtumbuhan Streptococcus viridans pada konsentrasi 0,8%, 0,4%, 0,2%, 0,1%, 0,05%, 0,025% pada media BHIB.........................................................30 Gambar 4.4 Koloni S. Viridans pada konsentrasi 0,1%, 0,15%, dan 0,2% pada media blood agar ......................................................................30 Gambar 4.5 Bagan prosedur penelitian .......................................................31

skripsi


Reza Al fessi


DAFTAR TABEL

Tabel 5.1 Hasil pengamatan ada tidaknya pertumbuhan bakteri...................32 Tabel 5.2 Rerata, simpang baku, dan uji independent t test ekstrak daun jambu biji dengan konsentrasi 0,1%, 0,15%, 0,2%..................................33

skripsi


Reza Al fessi


BAB I PENDAHULUAN

1.1

Latar Belakang Masalah Prinsip-prinsip perawatan saluran akar antara lain terdiri dari preparasi,

sterilisasi, dan pengisian saluran akar. Preparasi saluran akar adalah suatu tindakan pembersihan dan pembentukan saluran akar untuk persiapan pengisian saluran akar.1 Dalam membersihkan dan membentuk saluran akar harus diketahui jalan masuk langsung ke dalam saluran akar dan panjang gigi harus ditentukan. Penggunaan alat preparasi saluran akar harus secara berurutan mulai dari nomor kecil, serta gerakan alat preparasi yang digunakan harus tepat dan tidak boleh dengan tekanan.2 Selama melakukan preparasi saluran akar harus dilakukan tindakan irigasi saluran akar.1 Irigasi saluran akar adalah suatu tindakan pencucian atau pembersihan dengan cara memasukkan bahan irigasi ke dalam saluran akar, diharapkan semua kotoran yang berada di dalam saluran akar akan ikut keluar bersama-sama dengan bahan irigasi tersebut,1 dan dilakukan setiap pergantian nomor alat pada tahap preparasi saluran akar. Tujuan dari irigasi saluran akar adalah menghilangkan kotoran-kotoran, jaringan nekrotik, kuman, serpihan dentin di dalam saluran akar serta untuk membasahi saluran akar sehingga mempermudah preparasi saluran akar.2 Suatu larutan irigasi saluran akar yang baik harus mampu melarutkan kotoran organik dan anorganik, melumasi alat preparasi, membunuh mikroba, tidak toksik, dan ekonomis.3 Larutan irigasi yang paling baik adalah mempunyai

skripsi


Reza Al fessi


daya antimikroba yang maksimal dengan toksisitas yang minimal. Setiap bahan yang dipakai di bidang kedokteran gigi harus memenuhi syarat-syarat biokompatibilitas (dapat diterima oleh jaringan tubuh) yaitu tidak membahayakan pulpa dan jaringan lunak, tidak mengandung substansi yang bisa menyebabkan respon sistemik bila berdifusi dan diabsorpsi ke dalam sistem sirkulasi, dan bebas dari agen sensitisasi yang dapat menyebabkan respon alergi serta tidak berpotensi karsinogenik.4 Bahan irigasi yang biasa dipakai adalah yang mempunyai sifat antiseptik

artinya

suatu

bahan

yang

dapat

menghambat

pertumbuhan

mikroorganisme secara in vitro dan in vivo pada jaringan hidup.5 Mikroorganisme dan produknya merupakan penyebab utama penyakit jaringan pulpa dan periapikal. Pada kultur bakteri saluran akar, dapat ditemukan sebanyak 80% bakteri jenis streptococcus dan staphylococcus. Selain itu juga dapat ditemukan bakteri Gram negatif, lactobacili, dan corynebacterium spp.6 Mikroorganisme penyebab utama pulpitis irreversibel dan penyakit periapikal adalah Streptococcus viridans yaitu sebanyak kira-kira 63%, juga paling banyak di dalam rongga mulut. Streptococcus mitis dan Streptococcus salivarius merupakan bagian dari Streptococcus viridans yang sering dijumpai pada rongga mulut, juga saluran akar.7 Sejak zaman purbakala umat manusia sanggup membasmi berbagai penyakit dengan obat yang ditemukannya terutama dalam dunia tumbuhtumbuhan pada khususnya, dan dalam alam raya pada umumnya.8 Bangsa Indonesia telah mengenal dan memanfaatkan tumbuhan berkhasiat obat sebagai salah satu upaya menanggulangi masalah kesehatan. Pengetahuan tentang pemanfaatan tumbuhan obat tersebut merupakan budaya bangsa berdasarkan

skripsi


Reza Al fessi


pengetahuan dan pengalaman yang diwariskan turun-temurun. Agar peran pengobatan tradisional lebih dapat ditingkatkan, perlu upaya pengenalan dan pengembangan khasiat suatu tumbuhan obat.9 Penggunaan dan khasiat obat-obatan tradisional yang berasal dari tumbuhtumbuhan yang telah dikenal oleh masyarakat Indonesia adalah jenis tanaman daun, bunga, buah, akar, kulit, batang atau bagian kayunya yang dapat dimanfaatkan sebagai obat.8,9 Daun jambu biji merupakan sumber daya alam yang mudah didapat dengan harga relatif murah. Zat berkhasiat antibakteri dan anti virus yang terkandung dalam daun jambu biji adalah tannin , flavanoids, minyak atsiri yang kaya akan cineol dan empat triterpenic acids sebaik ketiga jenis flavanoid yaitu; quercetin, 3-L-4-4-arabinofuranoside (avicularin) dan 3-L-4pyranoside.10 Khasiat ekstrak daun jambu biji ini telah dibuktikan melalui penelitianpenelitian pendahulu. Hasil uji toksisitas akut pada mencit tidak ada perubahan perilaku, tidak ada perubahan kondisi tubuh, tidak ada perubahan berat badan, dan tidak ada reaksi kematian. 0,42 gr ekstrak daun jambu biji/ 20 gr BB mencit belum memberikan respons berupa kematian pada mencit. Dengan demikian dapat disimpulkan bahwa ekstrak daun jambu biji bersifat tidak toksik.11 Demikian perlu dilakukan penelitian apakah ekstrak daun jambu biji (Psidium Guajava Linn) mempunyai daya antibakteri dan pada konsentrasi berapakah dapat menghambat pertumbuhan bakteri Streptococcus viridans, sehingga nantinya dapat digunakan sebagai bahan alternatif irigasi saluran akar yang aman, mudah diperoleh, dan dapat digunakan pada pelayanan gigi masyarakat di daerah pelosok.

skripsi


Reza Al fessi


1.2

Rumusan Masalah Dari latar belakang masalah tersebut di atas maka timbul masalah, -

Apakah ekstrak daun jambu biji (Psidium Guajava Linn) mempunyai daya antibakteri terhadap Streptococcus viridans?

-

Berapakah

konsentrasi

hambat

minimal

(MIC)

terhadap

pertumbuhan Streptococcus viridans?

1.3

Tujuan Penelitian -

Untuk mengetahui daya antibakteri ekstrak daun jambu biji (Psidium Guajava Linn) terhadap Streptococcus viridans.

-

Untuk mengetahui berapa konsentrasi hambat minimum ekstrak daun jambu biji (Psidium Guajava Linn) terhadap Streptococcus viridans.

1.4

Manfaat Penelitian Ekstrak daun jambu biji (Psidium Guajava Linn) nantinya dapat

digunakan sebagai alternatif bahan irigasi saluran akar yang aman, mudah diperoleh, dan murah sehingga dapat digunakan pada pelayanan gigi masyarakat di daerah pelosok.

skripsi


Reza Al fessi


BAB 2 TINJAUAN PUSTAKA

2.1

Perawatan Saluran Akar

2.1.1

Definisi Perawatan saluran akar adalah salah satu perawatan konservasi gigi yang

berhubungan dengan diagnosa dan perawatan dari penyakit pulpa dan jaringan periapikal yang sesuai dengan kesehatan gigi. Bidang perawatan saluran akar meliputi gangguan/ penyakit jaringan pulpa yang memerlukan perawatan pulp capping, pulpotomy, pulpektomi, endo intrakanal.1 Perawatan saluran akar meliputi preparasi, sterilisasi dan pengisian saluran akar.

Perawatan

saluran

akar

merupakan

salah

satu

tindakan

untuk

mempertahankan gigi selama mungkin.1

2.1.2

Preparasi Salah satu tujuan preparasi saluran akar yaitu menghilangkan iritan yang

menimbulkan infeksi seperti bakteri, produk bakteri, jaringan nekrotik, debris organik, produk saliva, perdarahan, dan kontaminan lainnya. Preparasi saluran akar gigi akan menunjang proses sterilisasi dan menghasilkan pengisian yang baik sehingga didapatkan hasil yang maksimal.1 Pada tahap preparasi diperlukan bahan irigasi saluran akar dengan harapan semua kotoran yang berada di dalamnya akan ikut mengalir keluar bersama dengan cairan irigasi.2 Prinsip yang harus dipenuhi selama preparasi saluran akar adalah mempertahankan bentuk semula dari saluran akar dan membuat lebar pada bagian

skripsi


Reza Al fessi


koronal saluran akar untuk memungkinkan digunakan irigasi saluran akar yang bertujuan untuk mengeluarkan kotoran organik dan bakteri dari sistem saluran akar dan memungkinkan diperoleh ruang yang cukup untuk kondensasi bahan pengisi gutta percha.12

2.1.3

Irigasi Saluran akar Irigasi saluran akar adalah suatu tindakan pencucian atau pembersihan

dengan cara memasukkan bahan irigasi ke dalam saluran akar.1 Penggunaan bahan irigasi yang berlebihan pada umumnya dapat menyebabkan keradangan pada jaringan periapikal, sehingga pemakaiannya harus dibatasi untuk mengurangi akibat yang dapat ditimbulkan pada foramen apikal.13 Syarat bahan irigasi saluran akar antara lain mampu melarutkan jaringan nekrotik, menghilangkan serpihan dentin, membasahi saluran akar, bersifat antiseptik, mampu mengadakan penetrasi yang dalam, tidak merubah warna gigi, tidak toksik, tidak iritasi, tidak berbau, tidak berasa, dan ekonomis.2 Di bidang kedokteran gigi ada beberapa bahan irigasi saluran akar yang digunakan, diantaranya NaOCl 0,5 %, 1%, 2,5%, 3%, dan 5,25%; H2O2 3%, EDTA 15%, urea peroksida 10%, chlorhexidine, saline, aquadest, dan lain-lain.13

2.2

Mikrobiologi Saluran Akar Mikroorganisme dan hasil produknya memegang peranan penting dalam

terjadinya penyakit jaringan pulpa dan jaringan periapikal. Secara teoritis semua bakteri yang ada didalam rongga mulut bisa masuk ke dalam saluran akar dan berperan dalam infeksi jaringan pulpa.6 Dari penelitian yang telah dilakukan, dan

skripsi


Reza Al fessi


dari sekitar 350 spesies bakteri yang dikenal sebagai flora normal rongga mulut, hanya sebagian kecil saja yang dapat diisolasi dari pulpa terinfeksi, terutama bakteri anaerob obligat, beberapa anaerob fakultatif, dan bakteri aerob dalam jumlah kecil.2 Selama bertahun-tahun telah dilakukan penelitian mengenai bakteri saluran akar. Pada kultur bakteri saluran akar dapat ditemukan sebanyak 80% bakteri jenis streptococcus dan staphylococcus. Selain itu juga dapat ditemukan bakteri gram negatif, lactobacili, dan corynebacterium spp.6 Mikroorganisme penyebab utama penyakit pulpitis irreversible dan penyakit periapikal adalah Streptococcus viridans yaitu sebanyak kira-kira 63%, dan juga paling banyak didapatkan di dalam rongga mulut.7 Streptococus mitis dan Streptocous salivarius merupakan bagian dari Streptococus viridans yang sering dijumpai pada rongga mulut dan juga saluran akar.6

2.3

Streptococcus Viridans Streptococcus viridans ditemukan paling banyak di dalam saluran akar

(63%), merupakan bakteri golongan gram positif.1 Streptococcus viridans termasuk dalam golongan Streptococcus α hemolyticus yang mempunyai sifat menghasilkan hemolisa sebagian dengan warna hijau di sekitar koloni pada media agar darah. Oleh karena itu disebut Streptococcus viridans (viridans = hijau), yang termasuk golongan ini adalah Streptococcus mutans, Streptococcus mitis, Streptococcus sanguis, Streptococcus salivarius, Streptococcus constellatus, Streptococcus anginosus.6

skripsi


Reza Al fessi


Streptococcus viridans tumbuh baik dalam media darah (blood agar) dan 10% darah yang dieramkan selama 48 jam pada suhu 370C. Streptococcus viridans akan mati dengan pemanasan basah suhu 600C selama 1,5 jam, sedangkan dengan pemanasan kering pada suhu 1600C selama 1 jam. Bentuk koloni Streptococcus viridans adalah kecil, halus, jernih, cembung dan mukoid dengan diameter 0,5-1 mm. Pada pengecatan gram tampak adanya sel berderet menyerupai rantai, bentuk bulat dan lonjong, non motil, tidak berspora, dan gram positif.14

2.4

Antibakteri Antibakteri terdiri dari dua macam, yaitu antiseptik dan disinfektan.

Antiseptik merupakan merupakan bahan yang digunakan untuk menghambat perkembangbiakan bakteri (bakteriostatik) sedangkan desinfektan tidak hanya dapat menghambat bakteri tetapi juga membunuh bakteri dengan cara menghancurkan dinding selnya (bakteriosidik). Bahan antibakteri merupakan suatu bahan kimiawi yang mempunyai sifat membunuh mikroorganisme (bakteriosidik), atau dengan cara menghambat pertumbuhan mikroorganisme (bakteriostatik). Bahan antibakteri yang baik adalah bahan yang efektif dalam membunuh kuman tetapi tidak mengiritasi jaringan sekitarnya. Faktor penting efektifitas antibakteri tergantung dari bahan, konsentrasi, substansi, lama perawatan, dan kooperatif penderita.15

skripsi


Reza Al fessi


Secara umum, mekanisme kerja bahan antimikrobial terhadap bakteri adalah sebagai berikut : 15 1. Menghambat pertumbuhan kuman atau membunuhnya dengan cara bereaksi dengan sel protein dari bakteri sehingga terjadi denaturasi protein. Adanya koagulasi protein dari sel bakteri tersebut menyebabkan gangguan metabolisme bakteri. 2. Mengganggu sistem enzim dari bakteri sehingga terjadi gangguan fungsi fisiologis dan mengakibatkan terjadinya gangguan metabolisme bakteri. 3. Merubah permeabilitas dari sel membran dan menurunkan tegangan permukaan yang mengakibatkan kenaikan dari permeabilitas sel membran, sehingga air masuk dan menyebabkan pecahnya sel bakteri dan terjadinya kematian bakteri.

2.5

Tanaman Jambu Biji

2.5.1

Klasifikasi Klasifikasi daun jambu biji adalah sebagai berikut:

skripsi

Divisi

: Spermatophyta

Sub Divisi

: Angiospermae

Kelas

: Dicotyledonae

Bangsa

: Myrtales

Suku

: Myrtaceae

Genus

: Psidium

Species

: Psidium Guajava Linn


Reza Al fessi


2.5.2

Sinonim Nama lain dari Psidium guajava Linn adalah Psidium aromaticum blanco

dan Psidium pomiferum L. Di masyarakat khususnya di Jawa, nama yang sering disebut bukan jambu biji melainkan jambu klutuk.16

2.5.3

Uraian Tanaman Jambu biji (Psidium guajava Linn) dikenal juga dengan nama lain Psidium

aromaticum blanco. Tanaman ini asli berasal dari daerah Amerika Tropik antara Mexico sampai dengan Peru, menyebar ke daerah Asia oleh pedagang Spanyol dan Portugis. Tinggi tanaman dapat mencapai 10 m17, mulai berbuah antara umur 2 sampai dengan 4 tahun dan umur tanaman produktif 30-40 tahun.18 Kultivar jambu biji yang dikenal dan beredar di masyarakat, pedagang buah dan bunga bermacam-macam, diantaranya jambu krikil, jambu biasa, jambu mawar, jambu sukun dan jambu Bangkok. Ciri-cirinya adalah: batang berkayu bulat, kulit kayu licin, mengelupas, bercabang, warna coklat kehijauan. Daun tunggal, bulat telur, ujung tumpul, pangkal membulat, tepi rata, panjang 6-14 cm, lebar 3-6 cm, pertulangan menyirip, warna hijau kekuningan. Bunga tunggal di ketiak daun, mahkota bulat telur, panjang 1,5 cm, warna kekuningan. Buah buni, bulat telur, warna putih kekuningan.9,19

skripsi


Reza Al fessi


Gambar 2.1 Daun jambu biji (Psidium guajava)

2.5.4

Karakteristik Tumbuhan Jambu Biji Untuk menentukan karakteristik tumbuhan jambu biji, maka identifikasi

dilakukan dengan cara pengamatan secara visual meliputi bentuk, ukuran, warna dan rasa.

skripsi

Batang

:

Persegi, warna kecoklatan

Daun

:

Hijau muda ujung lancip

Panjang daun /cm

:

11,95

Lebar daun /cm

:

4,15

Jumlah tulang daun

:

38,8

Panjang tangkai (cm) :

0,73

Jumlah bunga

:

Satu

Warna buah

:

Hijau

Warna daging buah

:

Putih

Rasa buah

:

Manis halus


Reza Al fessi


Dibandingkan semua tipe jambu biji, kadar tannin tertinggi yaitu 12,66%, diperoleh dari daun jambu biji tipe ini.20

2.5.5

Khasiat Daun Jambu Biji Bagian tanaman yang sering digunakan sebagai obat adalah daunnya,

karena daunnya diketahui mengandung senyawa tannin 9-12%, minyak atsiri, minyak lemak dan asam malat.21 Daun jambu biji berkhasiat sebagai anti inflamasi, hemostatik, astrigen, antidiare, antibakteri dan antiseptik.9,19 Di masyarakat daun jambu biji digunakan sebagai obat disentri, haid tidak lancar, keputihan, pencernaan tidak baik pada anak-anak, radang usus, sakit kulit, sariawan.9

2.5.6

Kandungan kimia Zat berkhasiat yang dikandung daun jambu biji adalah zat samak (tannin ),

minyak atsiri (eugenol), flavonoid, triterpenoid, leukosianidin, Quercetin, asam arjunolat, resin dan minyak lemak. Dari senyawa tersebut tannin , flavonoid, tripenoid, leukosianidin dan keursetin secara farmakologi bermanfaat sebagai anti mikroba, astrigent, anti inflamasi, dan hemostatik.16 Bahan aktif yang paling banyak dikandung adalah tannin .19 1. Tannin Sebagaian besar literatur menyatakan bahwa kadar tannin dalam ekstrak daun jambu biji adalah paling besar. Tannin dinamakan juga asam tanah dan asam galatonat, ada yang tidak berwarna tetapi ada juga yang berwarna kuning

skripsi


Reza Al fessi


atau coklat. Asam tanat mempunyai berat molekul 1,701. Tannin terdiri atas sembilan molekul asam galat dan molekul glukosa.10 Secara kimia, tannin

merupakan substansi yang kompleks. Banyak

terdapat pada tumbuhan sebagai campuran polifenol yang sulit dipisahkan karena tidak dapat mengkristal. Berdasarkan gugus fenol yang dimiliki dan cara berikatannya, tannin

dapat dibedakan menjadi dua macam, yaitu tannin

terkondensasi (Condensed tannin) dan tannin terhidrolisasi (Hydrolized tannin), kedua macam tannin banyak dijumpai pada tanaman. Tannin

terkondensasi

hampir selalu dijumpai pada golongan gymnospermae juga banyak dijumpai pada golongan angiospermae. Sementara tannin tersebut juga dapat dijumpai bersama dalam suatu tanaman seperti pada daun oak.22 Tannin terkondensasi termasuk semua tannin sejati. Molekulnya lebih tahan terhadap kerusakan daripada tannin terhidrolisis dan memiliki katekin serta flavan 3,4 diol sebagai senyawa antara dalam biosintesisnya. Pada penambahan asam, enzim senyawa tannin ini mulai terurai menjadi senyawa kimia yang tidak larut yang dikenal sebagai phlobaphene.23 Karena senyawa tannin masuk di dalam fenol, maka memiliki kesamaan karakteristik dengan fenol. Fenol bekerja dengan cara denaturasi protein dan dapat merusak membran sel bakteri. Protein dapat mengalami denaturasi oleh karena pengaruh fenol sehingga aktivitas biologisnya hilang beserta fungsinya rusak.24 Tannin mengkoagulasi protein dari larutan dan dapat bergabung dengan protein, menjadi tahan terhadap enzim proteolisis. Ketika digunakan pada jaringan hidup, aktifitas tersebut diketahui sebagai astrigent. Tannin

skripsi


juga merupakan

Reza Al fessi


antiseptik seperti fenol, yang akan mengkoagulasi bakteri dan menghambat pertumbuhannya pada dosis tertentu akan membunuhnya.24 Tannin merupakan astrigent dan antiseptik yang kuat. Ketika digunakan pada permukaan kulit ataupun membran mukosa yang mengalami peradangan, tannin

mengkoagulasi protein dan membentuk antiseptik, lapisan pelindung

terletak di bawah tempat yang memungkinkan terjadinya regenerasi dari jaringan baru, serta menarik dan memperkuat jaringan, membuat kaku lidah dan mengurangi kepekaan indra perasa.22 Sebagai astrigent, tannin

sangat berguna untuk melegakan sakit

tenggorokan dan 7% dalam bentuk gel berguna untuk demam karena kedinginan dan luka, serta penyakit mulut. Pada bentukan cair dapat digunakan sebagai obat kumur yang dapat disiapkan menggunakan tannin 2% cair dengan gliserin dan boraks.23 Apabila diletakkan pada membran mukosa yang mengalami peradangan atau terluka, tannin membentuk suatu lapisan pelindung tipis untuk mengurangi pembentukan dan transudasi sekresi, mengontrol migrasi leukosit dan pembentukan plus jaringan ikat permukaan dengan jaringan ikat yang lebih dalam. Pembentukan lapisan pelindung dimaksudkan untuk mencegah masuknya iritan dari luar. Hal ini mengakibatkan mukosa mengering dan protein terkoagulasi dan memungkinkan proses penyembuhan luka lebih cepat dan terbebas dari infeksi.22 Tannin

banyak terdapat didalam tumbuhan berpembuluh, khususnya

dalam jaringan kayu, selain itu banyak terdapat pada bagian daunnya. Tumbuhan yang banyak mengandung tannin pada umumnya dihindari oleh hewan pemakan tumbuhan, karena senyawa ini mempunyai rasa sepat dan dianggap sebagai penolak hewan.10

skripsi


Reza Al fessi


2

Minyak atsiri (eugenol) Eugenol (C10H12O2) adalah golongan dari kelas allyl benzena, berwarna

kuning pucat dan merupakan ekstrak minyak nabati daun jambu biji, namun banyak terdapat pada cengkeh. Eugenol mudah larut dalam air dan larutan organik lainnya. Dalam dunia kedokteran, eugenol dimanfaatkan sebagai antiseptik, dan jika dicampur dengan zinc oxide berfungsi sebagai semen dalam bidang kedokteran gigi.25 3

Flavanoids Flavanoids atau bioflavinoids adalah golongan polyphenol yang banyak

terdapat pada tumbuhan, biasanya paling banyak terdapat pada biji-bijian, kulit buah, batang tanaman, dan bunga. Banyak tanaman obat-obatan yang mengandung flavanoids. Flavanoids memiliki efek antibakteri, anti inflamasi, anti alergi, anti virus, anti neoplasma, dan berpengaruh terhadap aktivitas vasodilatasi pembuluh darah. Struktur kimia umum molekul flavanoids memiliki 2 cincin benzene pada kedua sisi dari 3 rantai karbon. Berbagai macam kombinasi dari golongan hydroxyl, gula, oksigen, dan golongan methyl lainnya dapat melekat pada struktur kimia umum flavanoids yang dapat membuat berbagai macam kelas lain flavanoids seperti flavanols, flavanones, flavones, flavan-3-ols, anthocynins dan isoflavones.25 4

Kaemferol Kaemferol

yang

memiliki

nama

kimia

3,5,7-trihydroxy-2-(4-

hydroxyphenyl)-4H-1-benzopyran-4-one merupakan bentuk flavanoids alam yang banyak terdapat pada tanaman seperti anggur dan kacang-kacangan, Kaemferol

skripsi


Reza Al fessi


berbentuk kristal solid dan berwarna kuning dapat larut dengan mudah pada air, etanol hangat dan dietil eter. Kaemferol memiliki banyak senyawa glikosida, seperti Kaemferitrin dan astragalin. Seperti halnya dengan flavanoids, kaemferol memiliki sifat dan karakteristik yang sama dengan flavanoids yaitu dapat digunakan sebagai antibakteri, anti inflamasi, anti alergi, anti virus, anti neoplasma, dan berpengaruh terhadap aktifitas vasodilatasi pembuluh darah. Sifat antibakteri yang terdapat pada kaemferol disebabkan oleh gugus fenol yang terdapat pada struktur kimianya.25 5

Caffeic acid Caffeic

acid

(3-(3,4,dihydroxyphenyl

acid)-2-propenoic

acid

atau

C9H8O4) merupakan senyawa yang terkandung dalam ekstrak etanol daun jambu biji, berbentuk kristal solid dan relatif stabil apabila disimpan lama pada suhu kamar. Dalam solvent etanol atau dimetil formamide caffeic acid dapat bertahan dengan stabil selama enam bulan pada suhu -20oC. Caffeic acid bermanfaat sebagai anti inflamasi dengan menghambat sintesis prostaglandin dan beberapa produk lainnya yang berasal dari oksidasi asam arakidonat. Caffeic acid juga secara langsung menghambat aktivitas enzim siklooksigenase dan menghambat pelepasan asam arakidonat dari membran fosfolipid.26 6

Quercetin Quercetin adalah senyawa golongan flavanoid jenis flavanol dan flavon,

senyawa ini banyak terdapat pada tanaman famili myrtaceae dan solanacea. Telah dikenal sejumlah glikosida flavanol yaitu turunan dari quercetin, diantaranya adalah quercetin–3-L-rhamonoside atau quersitrin yang digunakan untuk pewarna tekstil, quercetin–3-rutinoside yang biasa disebut rutin dan quercetin 3 glukoside

skripsi


Reza Al fessi


atau isoquersitrin yang berkhasiat diantaranya untuk mengobati kerapuhan pembuluh kapiler pada manusia. Senyawa rutin terdapat dalam tanaman tembakau dari famili Solanaceae dan Eucalyptus macrorynh dari familia Myrtaceae.10

2.5.7

Efek Ekstrak Daun Jambu Biji terhadap Pertumbuhan Bakteri Daun jambu biji dengan nama latin Psidium guava Linn dan nama

simplisia Psidii folium adalah sebagai alternatif obat tradisional. Kandungan kimia dari daun jambu biji terdiri dari tannin , minyak astiri, quercetin, 3-arabino piranosida, guavaverin, leukosianidin, amritosida, avikularin, asam galat. Tannin bersifat astrigen, kandungan minyak atsiri dan bahan aktif lain sebagai ramuan antibakteri. Daya antiseptik tannin disebabkan oleh adanya gugus pirogalol dan gugus galoil yang merupakan gugus fenol yang dapat menghambat pertumbuhan bakteri atau membunuhnya dengan cara bereaksi dengan sel protein dari bakteri sehingga terjadi denaturasi protein. Adanya denaturasi protein pada dinding sel bakteri menyebabkan gangguan metabolisme bakteri sehingga terjadi kerusakan pada dinding sel yang akhirnya menyebabkan sel lisis.27 Senyawa fenol juga dapat mengganggu sistem enzim dari sel bakteri sehingga terjadi gangguan fungsi fisiologis dan mengakibatkan gangguan metabolisme bakteri.24 Dinding sel dan sistem enzim bakteri merupakan protein, protein memiliki struktur primer yang berasal dari hubungan kovalen asam-asam L-α-amino oleh ikatan peptide serta ikatan-ikatan non kovalen yang ikut memegang peranan dalam kestabilan struktur protein yaitu: ikatan hidrogen, interaksi hidrofobik, dan ikatan elektrostatik. Namun, zat-zat yang dapat menyebabkan denaturasi sepeti

skripsi


Reza Al fessi


urea, sodium dedosil sulfat, ion H+ ringan atau OH- dapat memutuskan ikatan non kovalen sehingga dapat menyebabkan denaturasi protein. Gugus fenol yang terdapat dalam tannin memiliki ion H+ dan OH- sehingga keberadaannya dapat menyebabkan putusnya ikatan non kovalen yang terdapat dalam protein dinding sel dan sistem enzim bakteri yang pada akhirnya menyebabkan denaturasi protein dan lisisnya sel. 28 Kemampuan untuk mempresipitasi protein memang karakteristik dari tannin , namun interaksi tersebut secara kimia kurang dimengerti. Tipe interaksi dan kekuatan interaksi tersebut diatur oleh struktur kimia tannin dan protein. Interaksi ini dipengaruhi oleh temperatur, pH, komposisi pelarut dan perbandingan tannin dan protein.23 Tannin terhidrolisis adalah derivat dari galic acid. Tannin terkondensasi adalah polimer flavanoids. Galic acid, eugenol, dan flavanoids mempunyai kesamaan dengan tannin yaitu campuran dari polifenol yang memiliki sifat dan karakteristik sama dengan fenol. Fenol bekerja dengan cara denaturasi protein dan dapat merusak membran sel bakteri. Protein dapat mengalami denturasi oleh karena pengaruh fenol sehingga aktivitas biologinya akan hilang beserta fungsinya akan rusak.24

2.6

Metode Identifikasi Bakteri Secara In Vitro Jumlah bakteri yang terdapat dalam media cair dapat ditentukan dengan:

1) menghitung sel individu dalam ruang mikroskopik, disebut dengan ruang Petroff-Hausser, 2) mengukur densitas optikal bakteri dari kultur suspensi dan membandingkannya dengan jumlah koloni yang ditemukan pada subkultur agar

skripsi


Reza Al fessi


padat, 3) menumbuhkan organisme pada fase Stationary (ketika jumlahnya mendekati 1x109bakteri/ ml), 4) dengan perbandingan visual kekeruhan dari media cair ke dalam standart yang menunjukkan jumlah bakteri dalam suspensi yang telah diketahui.29

2.7

Metode Penentuan Kepekaan Kuman terhadap Bahan Antimikroba

2.7.1

Metode Penipisan Lempeng Agar Merupakan metode klasik yang digunakan dalam tes in vitro yang

menghasilkan data kuantitatif untuk kadar bahan antimikroba yang dibutuhkan untuk menghambat pertumbuhan dari mikroorganisme spesifik. Biasanya disediakan satu seri lempeng agar dengan penipisan konsentrasi obat yang berbeda-beda.30 Bahan antimikroba di dilusi dengan media BHIB sampai mendapat konsentrasi yang diharapkan. Standar inokulum bakteri ditambahkan sampai pada volume yang sama pada masing-masing konsentrasi tanpa bahan antimikroba. Untuk kontrol positif pertumbuhan ditambahkan standar inokulum bakteri ke dalam media pertumbuhan. Untuk kontrol negatif, bahan antimikroba dan media pertumbuhan tidak diberi inokulum bakteri. Setelah diinkubasi, tabung diamati kekeruhannya yang menunjukkan indikasi pertumbuhan bakteri. Bakteri akan tumbuh pada tabung kontrol positif dan pada tabung lain yang tidak mengandung bahan antimikroba yang cukup untuk menghambat pertumbuhan bakteri. Konsentrasi terendah dalam menghambat pertumbuhan bakteri dideteksi dengan kekeruhan minimal (dicocokkan dengan kontrol negatif), hal ini disebut dengan konsentrasi hambat minimum (MIC). 29

skripsi


Reza Al fessi


2.7.2

Metode Difusi Metode Kirby-Bauer untuk menentukan sensitivitas bahan antibiotik

terhadap bakteri. Bahan antibiotik diletakkan pada permukaan media padat yang telah ditanami bakteri pathogen. Setelah 24 jam diinkubasi masing-masing antibiotik mempunyai daya resap ke dalam agar. Antibiotik yang menghambat pertumbuhan bakteri menghasilkan zona bening disekitar kepingan bahan antibiotik yang didalamnya tidak ada pertumbuhan bakteri. Diameter dari zona hambat tersebut mengindikasikan kadar obat yang dibutuhkan untuk menghambat bakteri.30

skripsi


Reza Al fessi


BAB 3 KERANGKA KONSEPTUAL DAN HIPOTESIS

3.1

Kerangka Konseptual Penelitian Ekstrak daun jambu biji

Tannin flavanoids kaemferol eugenol caffeic acid

Anti septik astrigent Gugus fenol (OH-)

Ikatan non kovalen Ion H+ dinding sel bakteri

denaturasi protein dinding sel bakteri

Sel bakteri lisis

S. viridans mati

Gambar 3.1 Bagan kerangka konseptual penelitian

Tannin, flavanoid, kaemferol, dan eugenol yang terkandung dalam ekstrak daun jambu biji bersifat antiseptik karena mempunyai mempunyai ion H+ dan OH-

skripsi


Reza Al fessi


yang dapat memutuskan ikatan non kovalen sehingga terjadi denaturasi protein dinding sel yang pada akhirnya menyebabkan denaturasi protein dan lisisnya selsel bakteri.28

3.2

Hipotesis Ekstrak daun jambu biji dapat menghambat pertumbuhan Streptococcus

viridans.

skripsi


Reza Al fessi


BAB 4 METODE PENELITIAN

4.1

Jenis Penelitian Jenis penelitian yang dilakukan adalah eksperimental laboratoris.

4.2

Rancangan Penelitian Rancangan penelitian ini adalah Post Only Control Design.

4.3

Unit Eksperimental Daun jambu biji.

4.3.1

Sampel Penelitian Kriteria sampel: daun jambu biji (daging buah putih) warna hijau muda, panjang ±12 cm, lebar ±4 cm.

4.3.2

Tehnik Pengambilan Sampel Random sampling.

4.3.3

Besar Sampel Jumlah sampel untuk tiap kelompok adalah sebagai berikut : 31

skripsi

n =

(Z α)2 x δ2 d2

n =

(1,96)2 x (1,6)2 (1,2)2

n =

5,02 ≈ 5

n

= jumlah sampel

Z α (harga std normal)

= 1,96

δ (var populasi)

= standar deviasi


Reza Al fessi


d (penyimpangan yg ditolerir) = ¾ x standar deviasi Jadi sampel yang dibutuhkan minimal sebanyak 5 buah per kelompok penelitian.

4.4

Variabel Penelitian Variable bebas

: Ekstrak daun jambu biji

Variable terikat

: Daya hambat ekstrak daun jambu biji Jumlah bakteri S. viridans

Variable terkendali

:

-

Metode dan cara kerja

-

Media penyimpanan ekstrak daun jambu biji.

-

Waktu kontak ekstrak daun jambu biji dengan S. Viridans

-

Media yang digunakan untuk pembiakan S. Viridans

-

Sterilisasi alat yang digunakan

-

Volume konsentrasi

4.5

Definisi Operasional 1. Ekstrak daun jambu biji adalah bentuk sediaan yang diperoleh dari daun jambu biji sejumlah 100 gr dimaserasi dengan etanol 96% sebanyak 1,5 lt lalu disaring dan etanol diuapkan menggunakan rotary evaporator suhu 40oC.32 2.

Minimum Inhibitory Concentration (MIC) adalah konsentrasi terendah dari ekstrak daun jambu biji dalam menghambat pertumbuhan bakteri S. viridans.

skripsi


Reza Al fessi


4.6

Bahan dan Alat Penelitian

4.6.1

Bahan Penelitian - Aquadest steril - Daun jambu biji berdaging buah berwarna putih - Media pembiakan : BHIB, Blood agar - Sediaan S. viridans dari stok kuman S. viridans TDC Unair - Ethanol 96% - Pelarut DMSO 2% 0,2 ml - Colony counter

4.6.2

Alat Penelitian Alat yang digunakan adalah : 1. petridish 2. tabung reaksi 3. rak tabung reaksi 4. mikro pipet 5. esicator (incubator) 6. gelas ukur 7. timbangan 8. gelas obyek dan penutup 9. rotary evaporator 10. autoclave 11. Corong Buchner 12. vortex

skripsi


Reza Al fessi


4.7

Lokasi Penelitian Penelitian ini dilaksanakan di Laboratorium Mikrobiologi Fakultas

Kedokteran Gigi Unair dan Laboratorium Fitokimia Fakultas Farmasi Unair .

4.8

Cara Kerja

4.8.1

Sterilisasi Alat dan Bahan yang Akan Digunakan Semua alat dan bahan yang digunakan dalam penelitian disterilkan dalam

autoclave dengan suhu 121oC selama 15 menit.

4.8.2

Pembuatan Ekstrak Daun Jambu Biji Pembuatan ekstrak daun jambu biji dilakukan di Laboratorium Fitokimia

Fakultas Farmasi Unair. Daun jambu biji sebanyak 100 gr dicuci sampai bersih kemudian ditiriskan untuk menghilangkan sisa air cucian. Setelah dilakukan perajangan, daun jambu biji dikeringkan di udara terbuka pada suhu kamar (tidak langsung terkena sinar matahari). Apabila sudah kering, daun dihaluskan dengan cara digiling menjadi serbuk. Serbuk yang diperoleh kemudian dilarutkan dengan menggunakan etanol 96% sebanyak 1,5 lt sampai seluruh bagian terendam. Larutan disaring dengan corong Buchner, sehingga didapatkan ekstrak dalam bentuk cair. Ekstrak cair tersebut kemudian diuapkan sampai bebas dari pelarut etanol dengan menggunakan rotary evaporator pada suhu 40oC selama 3 jam, sehingga menjadi ekstrak kental sebanyak 29,2 gr. Ekstrak diencerkan dengan aquadest steril dengan rumus perbandingan : 1% =

1mg 100ml

100% ≈

100mg = 100ml

atau

100% =

200 mg 200 ml

maka untuk volume 2 ml dibutuhkan 2 mg ekstrak daun jambu biji.

skripsi


Reza Al fessi


Gambar 4.1

4.8.3

serbuk daun jambu biji disaring dalam corong Buchner (kiri), lalu diuapkan dari etanol dengan Rotary evaporator (kanan) untuk mendapatkan ekstrak kental

Persiapan Pengukuran Konsentrasi Hambat Minimum Larutan

Ekstrak Jambu Biji terhadap Streptococcus viridans Pengenceran ekstrak dengan cara serial dilusi, konsentrasi kelipatan setengah dari konsentrasi sebelumnya, sampai konsentrasi tertentu yang diinginkan.33 Larutan ekstrak jambu biji (100%), dilakukan pencampuran dengan BHIB hingga konsentrasi menjadi 50%, 25%, 12,5%, 6,25%, 3,12%, 1,6%, 0,8%, 0,4%, 0,2%, 0,15%, 0,1%, 0,05%, 0,025%. Tabung I konsentrasi 50%, tabung II konsentrasi 25%, tabung III konsentrasi 12,5%, tabung IV konsentrasi 6,25%, tabung V konsentrasi 3,12%, tabung VI konsentrasi 1,6%, tabung VII konsentrasi 0,8%, tabung VIII konsentrasi 0,4%, tabung IX konsentrasi 0,2%, tabung X konsentrasi 0,15%, tabung XI konsentrasi 0,1%, tabung XII konsentrasi 0,05%, tabung XIII konsentrasi 0,025%. Kontrol (-), dilakukan pencampuran antara 1 ml BHIB dengan 1 ml ekstrak daun jambu biji dalam tabung reaksi. Kontrol (+), diambil sediaan 2 ml BHIB dalam tabung reaksi.29

skripsi


Reza Al fessi


4.8.4

Persiapan kultur S. Viridans Sediaan S. Viridans diambil 1 oase dari stok kuman S. viridans dan

dimasukkan ke dalam tabung yang berisi BHIB, dimasukkan ke dalam esicator kemudian diinkubasi dalam inkubator selama 1 x 24 jam dengan suhu 37oC. Setelah diinkubasi, bakteri distandarisasi dengan 0,5 Mc Farland (1,5 x 108 CFU/ml).

4.8.5

Metode Uji Kepekaan S. Viridans terhadap Ekstrak Daun Jambu Biji Dengan menggunakan micropipet, diambil 1 ml ekstrak daun jambu biji

dengan konsentrasi 100% dan dicampur dengan 1 ml BHIB dan 0,1 ml inokulum bakteri (1,5 x 108 CFU/ml).

27

Setelah itu, diinkubasi selama 24 jam dalam

esicator 37oC. Untuk kontrol negatif digunakan 1 ml ekstrak daun jambu biji yang dicampur dengan 1 ml BHIB dalam tabung reaksi tanpa diberi S. viridans,33 sedangkan untuk kontrol positif ditanam bakteri S. viridans ke dalam media BHIB tanpa ekstrak daun jambu biji. Hasil pengenceran seri ekstrak daun jambu biji yang mengandung bakteri S. viridans dan media BHIB (tabung I-XIII) dan tabung kontrol positif dan kontrol negatif divibrasi. Kemudian tabung I-XIII serta kontrol positif di masukkan dalam esicator dan diinkubasi dalam inkubator (37oC, 24 jam). Setelah itu dilakukan pengamatan hasil kultur bakteri, yang diamati adalah perbandingan kekeruhan dari media kultur antara tabung I-XIII dengan tabung kontrol negatif. Untuk menentukan konsentrasi hambat minimal ekstrak daun jambu biji terhadap bakteri S. viridans, pada penelitian ini tidak cukup hanya dengan cara

skripsi


Reza Al fessi


kualitatif yaitu dengan membandingkan kekeruhan media kultur. Media kultur berwarna gelap dan hasil kultur tidak terlihat adanya endapan sehingga sulit untuk menentukan MIC maka dilakukan subcultures pada media padat agar darah dengan metodepenipisan lempeng agar yaitu penentuan MIC secara kuantitatif. Kultur bakteri pada media cairan BHIB diambil 0,1 ml kemudian dibiakan dalam media agar darah. Dimasukkan ke dalam esicator, diinkubasi (37oC, 24 jam). Setelah diinkubasi selama 24 jam, pertumbuhan bakteri dihitung menggunakan alat quebec colony counter. Dari hasil perhitungan maka dapat ditentukan MIC yaitu konsentrasi terendah dari ekstrak daun jambu biji terhadap S. Viridans yang menghambat 90% dari jumlah awal bakteri adalah konsentrasi hambat minimum dari ekstrak daun jambu biji terhadap S. Viridans.33

50%,

25%, 12,5%, 6,25%, 3,12%, 1,6%,

Gambar 4.2 Ekstrak daun jambu biji terhadap pertumbuhan S. viridans pada konsentrasi 50%, 25%, 12,5%, 6,25%, 3,12% , 1,6% pada media BHIB

skripsi


Reza Al fessi


0,8%,

0,4%,

0,2%,

0,1%,

0,05%, 0,025%

Gambar 4.3 Ekstrak daun jambu biji terhadap pertumbuhan S. viridans pada konsentrasi 0,8%, 0,4%, 0,2%, 0,1%, 0,05%, 0,025% pada media BHIB

4.9

Identifikasi Bakteri Setelah diinkubasi selama 24 jam, seluruh tabung yang berisi larutan

ekstrak daun jambu biji dan Streptococcus viridans dikeluarkan dari esicator kemudian dilakukan pembacaan hasil. Pembacaan hasil dilakukan dengan menghitung pertumbuhan bakteri pada blood agar dengan quebec colony counter.29

Konsentrasi 0,1= 273 koloni

konsentrasi 0,15 = 62 koloni

konsentrasi 0,2= 1 koloni

Gambar 4.4 Koloni S. viridans pada konsentrasi 0,1%, 0,15%, dan 0,2% pada media blood agar

skripsi


Reza Al fessi


4.10

Prosedur Penelitian

Ekstrak daun jambu biji terlarut dalam aquadest steril (100%)

S. Viridans dengan media BHIB dalam tabung reaksi 0,5 Mc Farland suspensi bakteri yang mengandung 1,5 x 108CFU/ml

Pengenceran seri dengan BHIB hingga didapatkan konsentrasi 50%, 25%, 12,5%, 6,25%, 3,12%, 1,6%, 0,8%, 0,4%, 0,2%, 0,15%, 0,1%, 0,05%, 0,025% (Kontrol-) 1ml ekstrak + 1ml BHIB

(1ml BHIB + 1ml Ekstrak) 50%, 25%, 12,5%, 6,25%, 3,12%, 1,6%, 0,8%, 0,4%, 0,2%, 0,15%, 0,1%, 0,05%, 0,025% Setiap konsentrasi ditambahkan 0,1 ml S. Viridans

(Kontrol+) 2 ml BHIB+ 1 inokulum bakteri

Inkubasi 24 jam (37oC) Pengamatan kekeruhan (kualitatif) tidak terdeteksi disubculture pada blood agar Penipisan lempeng agar (menentukan MIC secara kuantitatif) Jumlah koloni dihitung dengan quebec colony counter Konsentrasi terendah yang dapat menghambat 90% dari pertumbuhan bakteri pada kontrol positif MIC

Gambar 4.5 Bagan prosedur penelitian

skripsi


Reza Al fessi


BAB 5 HASIL PENELITIAN DAN ANALISA DATA Dari gambar 4.3 dan 4.4 terlihat perbedaan kekeruhan dari masing-masing konsentrasi, tetapi metode perbandingan kekeruhan kurang meyakinkan karena warna ekstrak mempengaruhi kekeruhan. Maka dilakukan metode penipisan lempeng agar untuk menentukan MIC terhadap kuman secara kuantitatif.30

Tabel 5.1 Hasil pengamatan ada tidaknya pertumbuhan bakteri

Replikasi

50

– 1 – 2 – 3 – 4 – 5 Keterangan :

25

12,5

6,25

3,12

Konsentrasi (%) 1,6 0,8 0,4 0,2

– – – – –

– – – – –

– – – – –

– – – – –

– – – – –

– – – – –

– – – – –

–

: tidak terdapat pertumbuhan bakteri

+

: terdapat pertumbuhan bakteri

– + + – –

0,15

0,1

0,05

0,025

+ + + + +

+ + + + +

+ + + + +

+ + + + +

Dari hasil (tabel 5.1) pada konsentrasi 50% sampai dengan 0,4% tidak terdapat koloni bakteri. Pada konsentrasi 0,2%, 3 sampel menunjukkan tidak terdapat koloni bakteri, tetapi 2 lainnya terdapat koloni bakteri. Sedangkan pada konsentrasi 0,1% keseluruhan sampel menunjukkan adanya koloni bakteri. Dari hasil tersebut dapat ditentukan bahwa MIC antara konsentrasi 0,2% dan 0,1%, lalu di lakukan perhitungan bakteri pada konsentrasi 0,15%.

skripsi


Reza Al fessi


Tabel 5.2 Rerata, simpang baku, dan uji independent t test ekstrak daun jambu biji

dengan konsentrasi 0,1%, 0,15% terhadap bakteri S. viridans Konsentrasi

n

X

SB

0,1

5

291,6 17,36080

0,15

5

60,4

p 0,000

5,06454

Keterangan: n

: jumlah sampel

X

: rata-rata jumlah koloni bakteri

P

: terdapat perbedaan bermakna (p <0,05)

Pada penelitian ini akan dilakukan uji statistik Independent T test dengan tujuan untuk menentukan MIC antara konsentrasi 0,1% dan 0,15%. Dan sebelum melakukan uji Independent t-test terlebih dahulu dilakukan uji Kolmogorov Smirnov untuk mengetahui distribusi sampel. Hasilnya sampel berdistribusi normal. Untuk menentukan homogenitas, sampel dilakukan uji Leven’s test, hasilnya sampel homogen. Dari hasil uji statistik Independent t test didapatkan perbedaan bermakna (p < 0,05). Hal ini berarti ekstrak daun jambu biji dengan konsentrasi 0,15% adalah MIC.

skripsi


Reza Al fessi


BAB 6 PEMBAHASAN

Pada penelitian ini pengamatan koloni bakteri melalui metode perbandingan kekeruhan visual tidak dapat dilakukan karena warna ekstrak daun jambu biji keruh dan endapan koloni bakteri tidak terlihat, maka digunakan metode subcultures untuk mengetahui ada tidaknya koloni bakteri pada masingmasing konsentrasi.29 Untuk menentukan kepekaan kuman S. viridans terhadap ekstrak daun jambu biji digunakan cara penipisan lempeng agar.30 MIC ditentukan pada konsentrasi yang dapat menghambat pertumbuhan bakteri S. viridans sebesar 90% dari jumlah bakteri pada kontrol positif.33 Dari hasil perhitungan koloni antara konsentrasi 0,2% dan 0,1% terdapat perbedaan yang besar (belum menemukan persyaratan menghambat pertumbuhan bakteri S. viridans sebesar 90%), maka dilakukan dilusi pada konsentrasi diantaranya yaitu konsentrasi 0,15% dengan tujuan untuk mendapatkan hasil yang lebih signifikan. Perhitungan koloni pada konsentrasi tersebut, jumlah bakteri pada konsentrasi 0,15% adalah 10% dari kontrol positif pettumbuhan bakteri S. viridans (menghambat 90%), sehingga pada konsentrasi larutan ekstrak jambu biji 0,15% adalah MIC. Dari hasil penelitian menunjukkan bahwa ekstrak daun jambu biji mempunyai efek antimikroba terhadap Streptococcus viridans. Hal ini karena ekstrak daun jambu biji mengandung bahan aktif yang mempunyai efek antimikroba seperti, tannin , minyak atsiri (eugenol), flavanoid, triterpenoid, leukosianidin, quercetin, asam arjunolat, resin dan minyak lemak. Dari senyawa

skripsi


Reza Al fessi


tersebut tannin, flavanoid, triterpenoid, leukosianidin dan quercetin secara farmakologi bermanfaat sebagai antimikroba, astrigent, antiinflamasi dan hemostatik.21 Sebagian besar literatur menyatakan bahwa kadar tannin dalam ekstrak daun jambu biji adalah paling besar (8-12%).35 Tannin dinamakan juga asam tanat dan asam galatonat, ada yang tidak berwarna tetapi ada juga yang berwarna kuning atau coklat. Asam tanat mempunyai berat molekul 1,701. Tannin terdiri atas sembilan molekul asam galat dan molekul glukosa.10 Daun jambu biji terdapat tannin, dan tannin mengandung gugus galoil dan gugus pirogalol yang mempunyai sifat antimikroba. Kedua gugus tersebut bereaksi dengan protein membran bakteri dan menyebabkan koagulasi.24 Tannin dalam ekstrak daun jambu biji merupakan unsur yang penting. Apabila dilihat dari cara bereaksinya dengan protein membran bakteri maka tannin termasuk dalam bahan bersifat antiseptik sehingga dari hasil penelitian ini didapat bahwa ekstrak daun jambu biji memberikan efek antiseptik. Antiseptik tidak digunakan untuk menyembuhkan penyakit namun digunakan untuk mencegah terjadinya infeksi dengan cara merusak atau mematikan mikroba. Mekanisme kerja antiseptik ada beberapa macam, diantaranya

dengan

bekerja

sebagai

oxidizing

and

alkylating

agents,

mendenaturasi protein, menurunkan tegangan permukaan dan menghambat sintesa enzim.26 Tannin dengan gugus galoil dan gugus pirogalolnya bereaksi dengan protein membran S. viridans yang mengakibatkan rusaknya membran sitoplasma bakteri, sehingga fungsi membran sebagai barrier permeabilitas selektif, transpor

skripsi


Reza Al fessi


aktif, dan mengatur komposisi internal sel tersebut rusak, makromolekul dan ion keluar dari sel, kemudian sel rusak dan mengalami kematian.28

skripsi


Reza Al fessi


BAB 7 KESIMPULAN DAN SARAN

7.1 Kesimpulan Dari hasil penelitian dapat disimpulkan: -

Ekstrak daun jambu biji (Psidium guajava linn) mempunyai daya antibakteri terhadap pertumbuhan Streptococcus viridans.

-

Daya hambat minimum ekstrak daun jambu biji (Psidium guajava linn) terhadap pertumbuhan Streptococcus viridans pada konsentrasi 0,15%.

7.2 Saran Perlu dilakukan penelitian biokompatibilitas ekstrak daun jambu biji (Psidium guajava linn) dalam kegunaannya sebagai bahan irigasi.

skripsi


Reza Al fessi


DAFTAR PUSTAKA

1. Grossman L.I.; Oliet S. and Del Rio. C.E. Ilmu Endodontik Dalam Praktek. Alih Bahasa : Abyono R Ed ke 11. Jakarta : Penerbit Buku Kedokteran EGC. 1995. h : 196. 2. Walton dan Torabinejad. Prinsip dan Praktik Ilmu Endodontik. Alih bahasa : Narlan S. Ed ke 2 . Jakarta ; ECG. 1998. h : 362. 3. Harty, F. J. Endodonti Klinis. Edisi 3. Jakarta : Hipokrates. 1993. h :138. 4. Anusavice KJ, Philip's science of dental materials. 10th edition. Philadelphia: W.B.Saunders Company, 1996. p 75-9. 5. Jawetz E. Desinfectans & Antiseptics. In (Katzung BG, ed). Basic and Clinical Pharmacology. 4th edition. Connecticut: APleton & Lange. 1989. p 612-5. 6. Topazian, R.G., et.al. Oral and Maxillofacial Infections. 4th ed. W.B. Saunders Company, USA. 2002. p:32-4;148-50. 7. Ismiyatin, K. Konsentrasi Minimal Seduhan Teh Hijau Indonesia terhadap Daya Hambat Pertumbuhan Streptococcus viridans. Majalah Kedokteran Gigi (Dental Journal) 34. 2001. h: 52-4. 8. Moeryati dan soedibyo. Alam Sumber Kekuatan, Manfaat dan Kegunaan. Penerbit Balai Pustaka. 1998. p:160-3. 9. Sastroamidjojo, A.S. Obat Asli Indonesia. Cetakan VI. Dian Rakyat. Jakarta Timur. 2001. 10. Kartasaputra G. Budidaya Tanaman Berkhasiat Obat. Edisi II. Jakarta: PT. Rineksa Cipta. 1992. h: 25-6.

skripsi


Reza Al fessi


11. Naini, Amiyatun. Uji Toksisitas Akut Ekstrak Daun Psidium guava linn (daun jambu biji) Terhadap Mencit (Mus musculus). Indonesian Journal of Dentistry. 2004. h :63-5. 12. Samadi, Karlina. Preparasi saluran akar bengkok dan sempit dengan teknik balance force. Majalah Kedokteran Gigi (Dental Journal) Surabaya 36. 2002. h: 39-41. 13. Weine, F.S., et.al. Endodontic Therapy. 6th ed. Saint Louis. The C.V. Mosby Company. 2004. p:221-4, 498-503. 14. Aravena N.A. Identification of Streptococcus. Europe Journal of Microbiology. 1993.12. p: 21. 15. Katzung, B.G. Basic and Clinical Pharmacology. Farmakologi Dasar dan Klinik. Setio Harsono. Salemba Medika. Jakarta. 2001. Hal: 3-16. 16. Heyne K. Tumbuhan Berguna Indonesia. Jilid III. Badan Litbang Kehutanan, Jakarta. 1987. h : 1506. 17. Silva I. Franco SL. Molinari SL. Conegero CI. Miranda Neto MH. Cardoso MLC. Santana DMG. Iwanko NS. Nocoes Sobre o Organismo Humano e Utilizacao de Plantas Medici nais. Assoeste-Editora Educativa. Cascavel. PR. Brazil. 1995. p:203. 18. Teixeira RO ML Mantovano MS. Vincentini VE. Assesment of two Medical plants, Psidium Guajava L. And Achillea milefolium L. In vitro and vivo assays. The Brazilian Society of Genetics. Brazil. 2003. pp:552. 19. Lanawati F. Perbandingan Daya Anti Bakteri Ekstrak Daun Jambu Biji dari Dua Kultivar terhadap S. aureus dan E. coli. Thesis Program Pasca Sarjana. UNIKA WIDMAN. 1995.

skripsi


Reza Al fessi


20. Yuliani, Sri et al. Kadar Tanin dan Quersetin Tiga Tipe Daun Jambu Biji (Psidium guajava). Buletin TRO 1. 2003. h : 17-24. 21. Harborne JB, Baxter H, Moss GP. Phytochemical Dictionary, A Handbook of Bioactive Compound from Plants. 2nd ed. Taylor and Francis, Ltd. UK. 1999. p: 407,428,458,496,500,501,503,506,518,570,572,579. 22. Jaiarj et al. Anticough and antimicrobial activities of Psidium guajava Linn leaf extract, J. Ethnopharmacol. 1999. 67, 203-12. 23. Ann E. H. What,s Tannin?. Available at: http://www.TanninChemistry.com. Accessed on March, 28, 2002. 24. Goodman LS, Gilman A. The Pharmacological Basis of Theurapeutics. Vol. I. Mc Graw-Hill. Co. North America. 2001. p:48-57,67-70. 25. Wikipedia. Eugenol, Kaempferol, Fenol, Flavanoids. Available at: www.wikipedia.com. Accessed on Sept, 20, 2006. 26. Michaluart P, Masferrer Jl, Carother AM. Inhibitory Effects of Caffeic Acid Phenethyl Ester on The Activity and Expression of Cyclooxygenase-2 in Human Oral Epithelial Cells and in a Rat Model of Inflammation. Cancer Research 59. Osaka. 1999. p: 146-7. 27. Mc Kane, Larry & Kandel, Judy. Microbiology Essentials and Applications. United States: Mc Grow-Hill.Inc. 1985. h: 337-9. 28. Murray, RK. Biokimia Harper. Ed. 22. Penerbit Buku Kedokteran EGC. Jakarta. 1995. h: 48-9. 29. Forbes BA, Sahm DF, and Weissfeld AS. Laboratory Methods for Detection of Anti Bacterial Resistance. Bailey Scott’s Diagnostic Microbiology. 11th ed. St. Louis, Mosby Inc. 2002. p: 142-3; 229-50; 516-8.

skripsi


Reza Al fessi


30. Bonang, Gerard, Koeswardono, Enggar S. Mikrobiologi Kedokteran Untuk Laboratorium dan Klinik. PT Gramedia. 1982. h : 73-5. 31. Lemeshow S, David W. Adequency of Sample Size in Health Studies.New York: World Health Organization. 2001. h. 36-40. 32. Wijaya, Hendy. Uji daya hambat ekstrak daun jambu biji terhadap koloni S.sanguis. Skripsi Fakultas Kedokteran Gigi Universitas Airlangga Surabaya. 2006. 33. Mahon CR, Manuselis Jr G. Textbook of Diagnostic Microbiology. WB Saunders, Philadelphia. 1995. p:1134.

skripsi


Reza Al fessi


LAMPIRAN

Data hasil jumlah koloni Konsentrasi

1

2

3

4

5

n

X

SD

0,1

273 329 293 272 291 1458 291,6 17,36080

0,15

70

62

53

62

55

302

60,4

5,06454

0,2

1

0

0

0

1

2

0,4

0,41079

kontrol positif

:

522

NPar Tests One-Sample Kolmogorov-Smirnov Test

Konsentrasi 0,1 5

N Normal Parameters(a,b) Most Extreme Differences

Konsentrasi 0,15 5

Konsentrasi 0,2 5

Mean

219,3100

45,4260

,3000

Std. Deviation

17,36080

5,06454

,41079

,276

,206

,367

Positive

,276

,206

,367

Negative

Absolute

-,198

-,194

-,263

Kolmogorov-Smirnov Z

,617

,461

,822

Asymp. Sig. (2-tailed)

,841

,984

,510

a Test distribution is Normal. b Calculated from data.

T-Test Group Statistics

Jumlah

skripsi

Kelompok Konsentrasi 0,1 Konsentrasi 0,15

N

Mean

Std. Deviation

Std. Error Mean

5

219,3100

17,36080

7,76399

5

45,4260

5,06454

2,26493


Reza Al fessi


Independent Samples Test Levene's Test for Equality of Variances

F

Jum lah

Equal variances assumed Equal variances not assumed

2,212

Sig.

,175

t

Sig. (2taile d)

Df

t-test for Equality of Means Std. Error Mean Differen 95% Confidence Interval Difference ce of the Difference Lower

Upper

21,500

8

,000

173,8840

8,08761

155,23394

192,53406

21,500

4,676

,000

173,8840

8,08761

152,65319

195,11481

T-Test Group Statistics

Jumlah

Kelompok Konsentrasi 0,15 Konsentrasi 0,2

N

Mean

Std. Deviation

Std. Error Mean

5

45,4260

5,06454

2,26493

5

,3000

,41079

,18371

Independent Samples Test Levene's Test for Equality of Variances

F

Sig.

t

Sig. (2taile d)

df

t-test for Equality of Means Std. Error Mean Differen 95% Confidence Interval Difference ce of the Difference Lower

Jum lah

skripsi

Equal variances assumed Equal variances not assumed

8,590

,019

Upper

19,859

8

,000

45,1260

2,27237

39,88591

50,36609

19,859

4,053

,000

45,1260

2,27237

38,84908

51,40292


Reza Al fessi

BAB I - UNAIR REPOSITORY

Recommend Documents