..................................................................................................................... 9
.................................................................................. 9
................................................. 12 ............................................................................ 14 .............................................................................................................................. 14
.................................... 15 ....... 17 .................................................................... 20 ..................................................................... 22 ........................................................................................... 24 ............................................................................................. 25 ......................................................................... 27 ............... 28 ....................................... 29 ................................................................................ 29 ...................................................................................................................... 30 .......................................................................... 33 ANEXO 2. INTERPRETACIÓN Y RESULTADOS DE PRUEBAS BIOQUÍMICAS ........... 62 ................................... 69
Grupo somático ................................................................................................................... 69 Antisuero flagelar ............................................................................................................... 69
PRUEBA Autosuficiencia Aislamiento e en el identificación. diagnóstico Pruebas moleculares (PCR)
2009 31 LESP
2010 31 LESP
2011 31 LESP
0
0
0
2012 META 31 31 y D.F. LESP 0
31 y D.F.
o o
o o o
1
El sistema básico de triple embalaje consiste en la utilización de un recipiente primario, en el cual está contenida la muestra biológica (exudado faríngeo, exudado nasofaríngeo, lavado bronquio alveolar, biopsia, suero, etc.), el recipiente primario (p. ej. criotubos, tubos o frascos con tapa de rosca) debe ser hermético para evitar que la muestra se derrame y tiene que estar perfectamente etiquetado con el nombre o número de muestra del paciente. El recipiente primario deberá rodearse de material absorbente como gasa o papel absorbente y colocarse en un recipiente secundario hermético a prueba de derrames y golpes. Si se colocan varios recipientes primarios dentro de un recipiente secundario se deberá usar una gradilla y material absorbente para evitar algún derrame. Es importante mencionar que dentro del recipiente secundario (hielera) tiene que haber suficientes refrigerantes para mantener una temperatura de 4 a 8° C. Los recipientes secundarios deberán llevar las etiquetas de riesgo biológico y señal de orientación del recipiente, a su vez el recipiente secundario deberá ir contenido en un paquete externo de envío (caja de cartón o hielera) que proteja el contenido de elementos externos del ambiente y debe estar etiquetado con los datos del remitente, destinatario y señal de orientación. La documentación que se integre al triple embalaje deberá colocarse en la parte interior del paquete.
Materia fecal
*Medio de baja selectividad
Enriquecimiento para Salmonella spp Aislamiento en 2 medios de alta selectividad
Enriquecimiento (APA)
Aislamiento en TCBS
**Identificación Bioquímica **Identificación Bioquímica
Aglutinación para grupo y serotipo
Aglutinación para grupo
Aglutinación para serotipo
Prueba de susceptibilidad antimicrobiana
Pruebas moleculares PFGE (Solo en caso de brote)
* En caso de brote y se sospeche de Escherichia coli picar cinco colonias e identificar.
Prueba de susceptibilidad antimicrobiana
Identificación de genes de toxigenicidad
Pruebas moleculares PFGE (Solo en caso de urgencia)
** Se pueden emplear métodos automatizados o semi automatizados para la identificación.
Capacitación -Asesoría (Previa solicitud o invitación)
1ra Evaluación (marzo)
Evaluación Externa de la Calidad
Análisis de la información e informe general y particular (diciembre)
Envío de plan de Acciones (<80) (junio)
DIC
NOV
OCT
SEP
AGO
JUL
JUN
MAY
ABR
MAR
FEB
ENE
ACTIVIDAD
Capacitación en A programar, previa solicitud a través del Departamento de Control servicio de Muestras y Servicios del InDRE Envío del primer panel a los Laboratorios x Estatales de la Red de EFES Recepción de resultados del Panel en x el InDRE
Envío de resultados a la RNLSP Envío del segundo panel a los Laboratorios Estatales de la Red de EFES Recepción de resultados del Panel en el InDRE Envío de resultados a la RNLSP
x
x
x x
ANEXO 2. INTERPRETACIÓN Y RESULTADOS DE PRUEBAS BIOQUÍMICAS TABLA 1. INTERPRETACIÓN DE PRUEBAS BIOQUÍMICAS MIO
PRUEBA POSITIVA Medio turbio, Movilidad crecimiento en todo el medio El reactivo de Ehrlich Producción de indol o Kovac toma una coloración roja Descarboxilación de Color púrpura en el ornitina fondo del medio TSI PRUEBA POSITIVA Fermentación de Fondo del medio glucosa amarillo (A) Fermentación de Inclinación del medio lactosa y sacarosa amarillo (A) Burbujas o Producción de gas rompimiento del medio Precipitado negro en Producción de H2S el fondo o en todo el medio LIA PRUEBA POSITIVA
PRUEBA NEGATIVA
INDICADOR DE pH
Crecimiento sólo a lo Púrpura de bromocresol largo de la picadura pH neutro = morado No cambia la pH alcalino = K = púrpura = coloración del descarboxilación positiva reactivo pH ácido = amarillo = Color amarillo en el descarboxilación negativa fondo del medio PRUEBA NEGATIVA INDICADOR DE pH Fondo del medio sin Rojo de fenol cambio pH neutro = naranja Inclinación del medio pH alcalino = K = rojo pH ácido = A = amarillo roja (K) Sin formación de Gas = producto de la burbujas ni ruptura fermentación de la glucosa del medio H2S = reacción enzimática con el Sin precipitado negro tiosulfito de sodio y citrato férrico para formar un precipitado negro PRUEBA NEGATIVA INDICADOR DE pH Púrpura de bromocresol pH neutro = morado pH alcalino = K = púrpura = Descarboxilación de Fondo del medio Fondo del medio descarboxilación positiva lisina color púrpura color amarillo pH = ácido = A = amarillo = descarboxilación negativa Púrpura de bromocresol pH neutro = morado Desaminación de Inclinación del medio Inclinación del medio pH alcalino= R = rojo = lisina color rojo o vino color morado desaminación positiva pH ácido = A = amarillo = desaminación negativa Burbujas o Ausencia de burbujas Gas = producto de la Producción de gas rompimiento del o rompimiento del fermentación de la glucosa medio medio
TABLA 1. INTERPRETACIÓN DE PRUEBAS BIOQUÍMICAS (CONTINUACIÓN) Producción de H2S Caldo Arginina Descarboxilación de la arginina Caldo peptonado Producción de indol Oxidasa UREA DE CHRISTENSEN
Hidrólisis de la Urea
CITRATO DE SIMMONS
Ausencia de Precipitado negro en precipitado en el el fondo o en todo el fondo o en todo el medio medio PRUEBA POSITIVA PRUEBA NEGATIVA Color del medio púrpura PRUEBA POSITIVA
PRUEBA NEGATIVA No cambia la El reactivo toma una coloración del coloración roja reactivo Color azul en la tira Ausencia de reactiva coloración PRUEBA POSITIVA
Inclinación del medio color rosa
PRUEBA POSITIVA
Utilización del Citrato Inclinación del como única fuente de medio carbono color azul CALDO SORBITOL Fermentación del sorbitol
Color del medio amarillo
PRUEBA POSITIVA Color amarillo
PRUEBA NEGATIVA Inclinación del medio sin cambio de color o amarillo PRUEBA NEGATIVA Inclinación del medio color verde PRUEBA NEGATIVA Color rojo o sin cambio
INDICADOR DE pH Púrpura de bromocresol pH = neutro = ámbar pH = alcalino = púrpura = descarboxilación (+) pH = ácido = amarillo INDICADOR DE pH
Presencia de la enzima citocromo oxidasa INDICADOR DE pH Rojo de fenol pH neutro = amarillo o ligeramente rosa pH alcalino = rosa = hidrólisis de la urea positiva pH ácido = amarillo o sin cambio = hidrólisis de la urea negativa INDICADOR DE pH Azul de bromotimol pH neutro = verde pH alcalino = azul = utilización del citrato como única fuente de carbono INDICADOR DE pH Rojo de fenol pH neutro = anaranjado pH ácido = amarillo pH alcalino = anaranjado
TABLA 1. INTERPRETACIÓN DE PRUEBAS BIOQUÍMICAS (CONTINUACIÓN) CALDO MUCATO Utilización del Mucato CALDO MALONATO Utilización del Malonato
PRUEBA POSITIVA Color amarillo
PRUEBA POSITIVA Azul
PRUEBA NEGATIVA Sin cambio o verdoso
PRUEBA NEGATIVA Verde
INDICADOR DE pH Azul de bromotimol pH neutro = azul menta pH ácido = amarillo pH alcalino = azul menta verdoso INDICADOR DE pH Azul de bromocresol
TABLA 2. IDENTIFICACIÓN DE DIFERENTES ESPECIES DEL GÉNERO VIBRIO MICROORGANISMO
COLONIA
TSI
Vibrio cholerae Vibrio alginolyticus Vibrio charchariae Vibrio cincinnatiensis Vibrio damsella ** Vibrio fluvialis Vibrio furnissi
Amarilla Amarilla
Vibrio hollisae
Verde
Vibrio metschnikovii Vibrio mimicus Vibrio parahaemolyticus * Vibrio vulnificus
Amarilla A/A Verde A (K)/A Azul-verde K/A Azul-verde A (K)/A
Amarilla Amarilla Amarilla Amarilla
LIA
A (K)/A K/K A/A K/K A (K)/A K/K A (K)/A K/K (A) K/A K/K (A) A/A K/A A (K)/A K/A K/A
* : Ureasa positivo - : 0 a 10 % de positividad -/+ : 11 a 39 % de positividad V : 40 a 60 % de positividad +/- : 61 a 90 % de positividad + : 91 a 100 % de positividad
K/A K/A K/K K/K K/K
M
I
O
+ + + -/+ + + + (7 días) + + + +
+ +/+ -/+ -/+
+ V -
+ + + + + + -/+
+ + +
ROJO DE METILO +/+ V + + -
+
-
+
-
-/+ + + +
+ + V
+ + + +
+/-
CALDO ARGININA PEPTONADO
CALDO NUTRITIVO CON NaCl (%) V.P OXIDASA
0
1
3
6
8
10
12
GAS
+ +/+ + + + +
+ + + + + + +
+ -
+ + + + + + +
+ + + + + + +
V + + + + + +
+ +/+/+/-
+/-
-/+ -
+
-
-
+
-
+
+
+
-
-
-
-
+ -
+ + + +
+ + +
+ -
+ + + +
+ + + V + + + +/-
V + -
-
-
-
TABLA 3. RESULTADOS DE PRUEBAS BIOQUÍMICAS DE ENTEROBACTERIAS QUE DAN PRUEBA DE INDOL NEGATIVA MICROORGANISMO Salmonella spp Shigella spp A,B,C,D Citrobacter freundii Proteus mirabilis Proteus vulgaris Klebsiella pneumoniae Klebsiella rhinoscleromatis Enterobacter aerogenes Enterobacter cloacae Enterobacter sakasakii Pantoea agglomerans Serratia marcescens Providencia heimbachae
CITRATO +(95) -(100) -(100) +(78) +(65) -(85) +(98) -(100)
UREA -(99) -(100) -(100) -(56) +(98) +(95) +(95) -(100)
LIA K/K(98) K/A(100) K/A(100) K/A(100) R/A(100) R/A(100) K/K(98) K/A(100)
H2S TSI M I O +(95) K/A(99) +(95) -(99) +(97) -(100) K/A(100) -(100) -(50) -(99) -(100) K/A(98) -(100) -(100) +(98) +(78) K/A(78) +(89) -(77) -(100) +(98) K/A(98) +(95) -(98) +(99) +(95) K/A(98) +(95) +(98) -(100) -(100) A/A(98) -(100) -(100) -(100) -(100) K/A(100) -(100) -(100) -(100)
+(95) +(100) +(99) +(50) +(98) -(100)
-(98) +(65) -(99) -(80) -(85) -(100)
K/K(98) K/A(100) K/A(100) K/A(100) K/K(99) R/A
-(100) A/A(95) -(100) A/A(93) -(100) A/A(99) -(100) K/A(60) -(100) K/A(98) -(100) K/A(100)
+(97) -(100) +(98) +(95) -(100) +(96) +(96) -(88) +(91) +(85) -(80) -(100) +(97) -(99) +(99) -(54) -(100) -(100)
MUCATO +(90) -(100) -(90) +(100) -(100) -(100) +(90) -(100)
SORBITOL +(95) -(70) -(98) +(100) -(100) -(100) +(99) +(100)
+(90) +(75) -(99) -(60) -(100) -(100)
+(100) +(95) -(100) -(70) +(99) -(100)
MICROORGANISMO E. coli E. coli (inactiva) Klebsiella oxytoca Citrobacter diversus
CITRATO -(99) -(99) +(95) +(99)
UREA -(99) -(99) +(90) +(75)
LIA K/K (90) K/A (60) K/K(99) K/A(100)
H2S -(99) -(99) -(100) -(100)
Citrobacter amalonaticus Morganella morganii Morganella morganii biogrupo 1 Edwarsiella tarda
+(95)
+(85)
K/A(100)
-(100)
+(95)
-(100)
Edwarsiella tarda Hafnia alvei Providencia rettgeri
M +(95) -(95) -(100) +(95)
I +(98) +(80) +(99) +(99)
O +(65) -(80) -(100) +(99)
MUCATO +(95) -(70) +(93) +(95)
SORBITOL +(94) -(75) +(99) +(99)
-(95)
TSI A/A (95) K/A(75) A/A(100) K/A o A/A (50) K/A(65)
+(95)
+(100)
+(95)
+(96)
+(99)
R/A(99)
-(80)
K/A(99)
+(95)
+(95)
+(95)
-(100)
-(100)
+(100)
K/K(100)
-(85)
K/A(100)
-(100)
+(100)
+(80)
-(100)
-(100)
-(99)
-(100)
K/K(100)
+(100)
K/A(100)
+(98)
+(99)
+(100)
-(100)
-(100)
-(100) -(100) +(95)
-(100) -(96) +(98)
K/K(100) K/K(100) R/A
-(100) -(100) -(100)
K/A(100) K/A(95) K/A(95)
+(100) +(85) +(94)
+(99) -(100) +(99)
+(100) +(98) -(100)
-(100) -(100) -(100)
-(100) -(100) -(99)
TABLA 5. Diferenciación de Salmonella atípica CARACTERÍSTICA Salmonella Salmonella Salmonella Salmonella Salmonella typhi paratyphi A sp arizona choleraesuis Movilidad + + + + + Producción de indol Descarboxilación de la + + + + ornitina Fermentación de la + + + + + glucosa Fermentación de sacarosa Fermentación de lactosa Producción de gas + + +(-) + Producción de H2S +* + +(-) +/Descarboxilación de la + + + + lisina Uso del malonato + Utilización de Citrato + + Hidrólisis de la Urea Caldo mucato +(-) +(-) Caldo sorbitol + + + + + + :Reacción positiva - :Reacción negativa ( - ):Reacción ocasionalmente negativa +/- reacción al 50 % * se produce en poca cantidad
TABLA 6. Prueba de aglutinación en portaobjetos
PRUEBA POSITIVA Formación de grumos
PRUEBA NEGATIVA Suspensión homogénea
CONTROL NEGATIVO Suspensión homogénea
TABLA 7. Lista de antisueros para la prueba de aglutinación flagelar de Salmonella en tubo
O:2 O:4 O:7 O:8 O:9 O:3,10 O:3,19 O:11 O:13,22 O:13,23 O:6,14 O:16 O:17 O:18 O:21 O:28 O:30 O: 35 O:40 O:44 O:47
Grupo somático (A) (B) (C1 ) (C2 ) (D1 ) (E1-E3 ) (E4 ) (F) (G1 ) (G2 ) (H) (I) (J) (K) (L) (M) (N) (O)
Antisuero flagelar a, g, m, p, v, 5 f, g, s, h, r, i, 2, v, m, t, 7, z4, z23, b, 5, d, enx, x, z15 b, g, m, s, t, r, w, 5, z10, d, h, k, z29, enx, x, z15 d, h, r, 2, z4, z24, k, 5, enx, z10, i, z6, g, d, m, v, q, s, t, 5, 2, p, z28 h, v, 5, 6, 7, w, z10, z6, r, y g, s, t, i, 2 a, r, 5, enx, z28, z13, x, z15, z29 z, 6 f, g, z, w, b, 5, 6, s 7, d, y c, 5, y d, 5 z23, z4 b, enx, y 7, y b, enx f, g, z4, z23 b, enx, x, z15 7, c, z10, enx, x, z15 i, enx, x, z15
TABLA 8. Prueba de aglutinación en tubo PRUEBA POSITIVA PRUEBA NEGATIVA CONTROL NEGATIVO Formación de grumos Suspensión homogénea Suspensión homogénea
TABLA 9. DETERMINACIÓN DE ANTÍGENOS SOMÁTICOS DE VIBRIO CHOLERAE POR AGLUTINACIÓN EN PORTAOBJETOS Control Interpretación del resultado O1 Poliv O1 O1 Ogawa O:139 negativo Inaba + + V. cholerae O1 Inaba -
+
-
+
-
V. cholerae O1 Ogawa
-
-
-
-
-
V. cholerae No O1 Neg a O:139
-
-
-
-
+
V. cholerae No O1 Pos a O:139
+
+
+
+
+
V. cholerae No O1 Neg a O:139
-
+
-
-
-
V. cholerae No O1 Neg a O:139
-
-
+
-
-
V. cholerae No O1 Neg a O:139
-
+
+ débil
+
-
V. cholerae O1 Ogawa
