OPTIMASI DAN KARAKTERISASI A-AMILASE DARIISOLAT

Berita Biologi 10(3) - Desember 2010

OPTIMASI DAN KARAKTERISASI a-AMILASE DARIISOLAT AKTINOMISETES YANG BERASAL DARI KALIMANTAN TIMUR1 [Optimization and Characterization of Amylase from Actinomycetes Isolates From East Kalimantan] Yati Sudaryati Soeka Bidang Mikrobiologi, Pusat Penelitian Biologi-LIPI Jin Raya Jakarta Bogor, Km 46, Cibinong 16911 e-mail: [email protected] ABSTRACT Forty-one actinomycetes isolates from East Kalimantan held in Microbiology Division Collection-UPI, and their ability to produce a-amylase has been assessed. Those 41 number of actinomycetes isolates performed amylolytic activity as shown by clear zone areal after being poured with iodium solution. The bacteria produced high a-amylase when was grown in media containing starch soluble 2% the a-amylase activity in media containing 8.24 U/ml. The isolate (number 7) was the most active compared to another (number 100) and it was identified as Nocardia; the activity of this enzyme obtained was 12.93 U/ml (one unit activity is defined as mol of glucose produced per ml per minute). The maximum temperature for enzyme reaction was 40°C, optimum pH was pH 7.5 the a-amylase activity were 15.76 U/ml and 31.11 U/ml, respectively. From kinetic characterization study, it was found that enzyme showed Km and Vmax value of 7.62 % (b/v) and 71.10-2 umol/ml/minute respectively at condition of temperature 40°C, pH 7.5 and incubation time 10 minute. Kata kunci/ key words: amilase, aktinomisetes/actinomycetes, karakterisasi/characterization, Nocardia, Streptomyces.

PENDAHULUAN

Media

Aktinomisetes adalah nama kolektif untuk delapan suku bakteri yang berbeda yang tumbuh sebagai filamen sel yang bercabang panjang atau pendek. Mayoritas mikroba ini adalah saprofit tanah dan air (organisme yang hidup dari bahan organik yang membusuk dan sangat penting karena perannya dalam daur alam, seperti pembusukan bahan organik dan penambatan nitrogen. Enzim a-amilase (EC.3.2.11), dapat diisolasi dari mikroba antara lain kapang, bakteri dan khamir. Enzim yang diisolasi dari mikroba memiliki beberapa keunggulan antara lain produksinya tidak terbatas, dapat diproduksi hingga skala tertentu, lebih ekonomis dan produktifitasnya dapat ditingkatkan. Dalam penelitian ini telah dilakukan seleksi Aktinomisetes yang mempunyai kemampuan mendegradasi pati terlarut.

Media untuk memelihara isolat bakteri digunakan nutrien agar dengan komposisi beef extract 3 g, pepton 5 g, bakto agar 20 g dan dipersiapkan dalam satu liter akuades. Untuk isolasi dan media produksi enzim amilase digunakan media YPSs {Yeast

BAHAN DAN C ARA KERJA Biakan bakteri Sebanyak 41 biak Aktinomisetes yang digunakan dalam penelitian ini berasal dari Bangkirai Kalimantan Timur koleksi Bidang Mikrobiologi, Pusat Penelitian Biologi-LIPI Cibinong.

Pepton Starch soluble) cair dan padat dengan komposisi: 0,2% ekstrak khamir, 0,5% pepton, 0,3% KH2PO4,0,05% MgSO4.7 Up, 0,01 % Cd£\. 2 Rp, 20 g agar dan 2% pati terlarut sebagai sumber karbon (Mangunwardoyo et a!., 1982). Isolasi dan seleksi isolat penghasil amilase Isolasi dilakukan setelah tampak adanya pertumbuhan masing-masing contoh yang diinokulasikan dan diinkubasikan selama 2 hari pada suhu kamar dalam medium selektif (YPSs cair yang mengandung 2% pati terlarut). Bakteri yang tumbuh diisolasi dengan menginokulasikan beberapa tetes dari medium cair tersebut pada permukaan media YPSs padat. Setiap isolat murni dipelihara dalam media Nutrien Agar miring. Seleksi terhadap kemampuan isolat dalam menghasilkan amilase dilakukan secarakualitatif, semikuantitatif dan kuantitatif. Pengujian aktivitas amilase secara kualitatif dan semikuantitatif dilakukan dengan cara menumbuhkan

'Diterima: 27 Januari 2009 - Disetujui: 15 Januari 2010

361

Soeka - Optimasi dan Karakterisasi a-amilase dari Isolat Aktinomisetes

isolat-isolat Aktinomisetes pada permukaan media agar YPSs. Satu ose biakan bakteri yang berumur 3 hari ditumbuhkan pada permukaan media agar YPSs, kemudian diinkubasikan selama 2 hari pada suhu kamar. Adanya aktivitas amilase terlihat dengan muncuhiya zona bening di sekitar koloni setelah dituang dengan larutan iodin. Hasil bagi antara diameter zona bening dan diameter koloni dinyatakan sebagai aktivitas enzim secara nisbi (Naiola, 2001).

Penentuan kondisi optimum suhu dan pH Pengaruh suhu terhadap enzim amilase diuji dengan cara mengukur aktivitasnya pada berbagai macam suhu 30,40,50,60 dan 70°C. Untuk melihat pengaruh pH terhadap aktivitas enzim a-amilase, pengujian dilakukan dalam larutan bufer glisin pada (pH 3,5-10). Larutan bufer yang digunakan adalah 0,05 M bufer glisin HC1 (pH 3,5 - 6), 0,05 M bufer glisin NaOH (pH7-10).

Penentuan kondisi optimum aktivitas amilolitik Starter dibuat dengan menambahkan akuades steril ke dalam biakan berumur 5 hari, sehingga diperoleh suspensi 109 CFU/ml (OD540nm = 0,5). Sebanyak 2,5% suspensi diinokulasikan ke dalam media produksi dan selanjutnya diinkubasikan pada suhu kamar. Setelah dua hari inkubasi, enzim amilase diekstraksi dengan cara sentrifugasi pada kecepatan 15.880 x g selama 10 menit, dan larutan enzim yang diperoleh diuji aktivitas amilolitiknya.

Penentuan berbagai konsentrasi substrat pati Sebanyak 0,5 ml larutan enzim ditambahkan ke dalam 0,5 ml substrat pati dengan berbagai konsentrasi 0,05,0,5,1,0,1,25,1,50,1,75,2, dan 2,5% pati terlarut dalam 0,05 M larutan bufer glisin, pH sesuai pH optimum , kemudian diinkubasikan pada suhu sesuai suhu optimum selama 10 menit. Produk yang terbentuk berupa gula reduksi (glukosa) diukur dengan metoda Bernfeld (1995) menggunakan asam 3,5 dinitrosalisilat (DNS) dan konsentrasinya dikonversikan dengan standar glukosa.

Pengujian aktifitas amilase Sebanyak 0,5 ml larutan enzim ditambahkan ke dalam 0,5 ml substrat yaitu 2 % pati terlarut dalam 0,05 M larutan bufer glisin-NaOH pH 7, kemudian diinkubasikan pada suhu 40 °C selama 10 menit. Produk yang terbentuk berupa gula reduksi (glukosa) diukur dengan metoda Bernfeld (1995) menggunakan asam 3,5 dinitrosalisilat (DNS) dan konsentrasinya dikonversikan dengan standar glukosa (Kiran et al., 2005). Satu unit aktivitas a-amilase adalahbanyaknya enzim yang dapat menghasilkan gula reduksi sebanyak 1 mmol per menit per ml larutan enzim pada kondisi pengujian yang dilakukan. Pengujian dilakukan 2 kali ulangan. Penentuan berbagai macam substrat sumberkarbon Sebanyak 0,5 ml larutan enzim ditambahkan ke dalam berbagai macam substrat pati 2% masing-masing terdiri atas pati terlarut, maizena, tapioka, tepung beras ketan, tepung beras, tepung terigu dan sagu dalam 0,05 M larutan bufer glisin- NaOH pH 7, kemudian diinkubasikan pada suhu 40 °C selama 10 menit. Produk yang terbentuk berupa gula reduksi (glukosa) diukur dengan metoda Bernfeld (1995) menggunakan asam 3,5 dinitrosalisilat (DNS) dan konsentrasinya dikonversikan dengan standar glukosa.

362

Penentuan Km dan Vmaks Km (konstanta Michaelis) dan V|mks (kecepatan maksimum reaksi) merupakan dua parameter kinetika enzim. Nilai K m tidak tergantung pada besarnya konsentrasi enzim, sedangkan Vmaks besarnya dipengaruhi oleh besarnya konsentrasi enzim. Km dapat diartikan sebagai ukuran afmitas enzim terhadap substrat. Penentuan K dan V . ini dilakukan pada m

maks

"

pH dan suhu inkubasi optimum yang diperoleh pada saat optimasi kerja enzim. Penentuan Km dan Vmaks dengan kurva garis lurus ini dikenal sebagai metode Lineweaver-Burk. HASIL Hasil isolasi dan seleksi Sebanyak 41 isolat Aktinomisetes telah diisolasi dengan cara menginokulasikan masingmasing contoh ke dalam medium selektifYPSs cair yang mengandung 2% pati terlarut. Hasil pengujian secara kualitatif menunjukkan bahwa sebanyak 31 isolat memiliki aktivitas amilolitik, yang ditandai dengan adanya zona bening di sekitar koloni. Selanjutnya isolat-isolat yang menunjukkan aktivitas amilolitik


positif secara kualitatif diukur secara semikuantitatif dengan cara membandingkan diameter zona bening di sekitar koloni dengan diameter koloni setelah dituangi larutan Iod (Tabel 1).

Hasil penghitungan secara semikuantitatif menunjukkan terdapat 2 isolat memiliki diameter zona bening (aktivitas a-amilase nisbi) dengan nilai sama dengan 3; 16 isolat dengan nilai antara 2,0 - <3,0;

Tabel 1. Hasil pengujian aktivitas amilase dari 41 isolat secara kualitatif dan semikuantitatif

No. 1. 2. 3. 4. 5. 6.

7. 8. 9. 10. 11. 12. 13. 14. 15. 16. 17. 18. 19. 20. 21. 22. 23. 24. 25. 26. 27. 28. 29. 30. 31. 32. 33. 34. 35. 36. 37. 38. 39. 40. 41.

Isolat LIPIMC-A-0003 LIPIMC-A-0004 LIPIMC-A-0006 LIPIMC-A-0007 LIPIMC-A-0008 LIPIMC-A-0010 LIPIMC-A-0013 LIPIMC-A-0014 LIPIMC-A-0016 LIPIMC-A-0017 LIPIMC-A-0018 LIPIMC-A-0019 LIPIMC-A-0021 LIPIMC-A-0030 LIPIMC-A-0031 LIPIMC-A-0032 LIPIMC-A-0033 LIPIMC-A-0034 LIPIMC-A-0038 LIPIMC-A-0043 LIPIMC-A-0048 LIPIMC-A-0053 LIPIMC-A-0066 LIPIMC-A-0067 LIPIMC-A-0068 LIPIMC-A-0071 LIPIMC-A-0072 LIPIMC-A-0085 LIPIMC-A-0087 LIPIMC-A-0089 LIPIMC-A-0095 LIPIMC-A-0097 LIPIMC-A-0099 LIPIMC-A-0100 LIPIMC-A-0104 LIPIMC-A-0105 LIPIMC-A-0106 LIPIMC-A-0107 LIPIMC-A-0116 LIPIMC-A-0119 LIPIMC-A-0122 Diameter zona bening 3,0 mm Diameter zona bening 2,0-<3,0 mm Diameter zona bening l,5-< 2,0 mm

Uji kualitatif (zona bening) ++ +++ ++++ -

Uji semikuantitatif (Diameter zona bening/koloni)

+++

2,0 2,0 2,0

+++ +++ ++ +-H-

1,5 2,0 3,0

1,5 2,0

++ ++ +++

1,67

++ +++ ++ ++ +++ +++ ++ . ++ ++ +++

1,57 2,33 1,75 1,83

+-H-

+++ +++ ++++

++ ++ + + +++ +++

1,5 2,0

2,0 2,0 1,57

1,5 1,75

2,0 2,0 2,0 2,0 3,0 1,6 2,0 1,33 1,33

2,0 2,0 Diameter zona bening < 1,5 mm Tidak ada zona bening

363


11 isolat dengan nilai antara l,5-< 2,0; dan 2 isolat dengannilai
Nocardia (no. 7) dan Streptomyces (no. 100) selanjutnya diuji kemampuan a-amilasenya secara kuantitatif. Uji aktivitas secara kuantitatif dilakukan untuk mengetahui aktivitas enzim a-amilase filtrat biakan dengan menggunakan media YPSs cair mengandung 2% pati terlarut sebagai bahan penginduksi. Hasil pengujian menunjukkan bahwa isolat Nocardia no. 7 dan Streptomyces no. 100 mempunyai kemampuan menghasilkan enzim a-amilase tertinggi masing-masing sebesar 22,69 U/ml dan 19,32 U/ml pada hari ke 2 (Gambar 1).

2

3

4

5

6

Waktu inkubasi (hari)

Gambar 1. Aktivitas a-amilase Streptomyces (no. 100) dan Nocardia (no. 7) selama enam hari inkubasi.

Penentuan kondisi optimum sumber-sumber karbon sebagai substrat untuk produksi a-amilase Isolat yang selanjutnya diuji adalah Nocardia no.7. Pemilihan substrat untuk pengujian aktivitas enzim yang tepat sangat diperlukan untuk mendapatkan hasil yang maksimal, karena selain sebagai sumber karbon amilum juga merupakan induktor untuk sekresi amilase. Pengaruh berbagai jenis tepung komersial pada substrat amilase dari Nocardia no.7 menunjukkan bahwa dari 7 jenis tepung yang digunakan pati terlarut dan maizena merupakan substrat karbon yang sangat baik (Tabel 2). Selanjutnya pati terlarut yang digunakan untuk penelitian sebagai sumber karbon. Pengaruh suhu dan pH terhadap aktivitas enzim a-amilase Pada penentuan optimasi suhu aktivitas enzim a-amilase kasar dilakukan pada isolat Nocardia no.7 dengan variasi suhu 30,40,50,60, dan 70°C. Aktivitas a-amilase tertinggi adalah pada suhu 40°C yaitu sebesar 15,76 U/ml. Aktivitas enzim mulai menurun

40

50

60

Gambar 2. Pengaruh suhu terhadap aktivitas enzim aamilase Nocardia no.7.

Tabel 2. Pengaruh sumber-sumber karbon sebagai substrat untuk produksi a-amilase Nocardia no. 7.

No. 1. 2. 3. 4. 5. 6. 7.

364

Sumber karbon Pati terlarut Maizena Sagu Beras ketan Beras Terigu Tapioka

70

Suhu (C)

Aktivitas a-amilase (U/ml) 12,93 12,12 11,82 5,11 5,11 4,51 2,33


ketika suhu dinaikkan hingga mencapai 70°C. Tampak bahwa suhu optimum untuk berlangsungnya reaksi enzim pada suhu 40°C (Gambar 2). Pengaruh pH terhadap aktivitas a-amilase kasar Nocardia no.7 diuji dengan mereaksikan larutan enzim padaberbagaiderajatkeasaman(pH).Hasilpengamatan menunjukkan bahwa apabila reaksi enzim a-amilase dilakukan dalam 0,05 M bufer glisin-NaOH, aktivitas amilase tertinggi pada pH 7,5 dan 8 sama nilainya yaitu sebesar 31,11 U/ml (Gambar 3) dan untuk selanjutnya untuk perlakuan Km dan Vmaksnya adalah dengan pH 7,5.

Mill

8 20 I 15

3.5

4.5

6.5

7.5

8

dengan nilai tertinggi pada konsentrasi 2% sebesar 8,2353 U/ml. Pada konsentrasi 2,5% aktivitas enzim menurun. Km dan Vmaks Kecepatan reaksi yang dikatalisis oleh enzim bergantung pada konsentrasi substrat. Penentuan harga Km dan Vmaksditentukan berdasarkan persamaan Michaelis- Menten yang menyatakan bahwa 1 /V = Km / V maks (!/[S])+ 1/VmaksKm dan V^suatukonstanta! maka persamaan ini dianalogikan dengan persamaan regresiy=a+bx,dengany= 1/V,x= l/[S],a= 1 / V ^ dan b = Km / Vmaks, sehingga jika dimasukkan ke dalam grafik diperoleh persamaan garis lurus LineweaverBurk (Gambar 5). Berdasarkan perhitungan menggunakan persamaan di atas diperoleh untuk isolat Nocardia no.7 besarnya nilai Kra dan V^ masing-masing71 .10"2% (b/v) dan 7,62 U/ml/menit pada kondisi suhu 40°CdanpH7,5.

8.5

Derajat keasaman (pH)

Gambar 3. Pengaruh pH terhadap aktivitas dan stabilitas enzim a-amilase Nocardia no.7. Penentuan kondisi optimum konsentrasi substrat Untuk mempelajari Km dan Vmaks, maka isolat Nocardia no.7 dengan berbagai konsentrasi substrat pati terlarut pada suhu 40 °C, pH 7,5 dihitung dengan persamaan Lineweaver-Burk. Pada Gambar 4 dapat dilihat pengaruh dari berbagai konsentrasi substrat pati terlarut (0.5.1.0.1.25.1.50.1.75.2 dan 2.5 %). Didapat

0

0.5

1

1.5

2

2.5

3

Konsentrasi substrat pati (%)

Gambar 4. Pengaruh konsentrasi substrat pati (%) terhadap aktivitas enzim a-amilase.

10

15

1/S

Gambar 5. Kurva antara kecepatan reaksi amilase pada kondisi optimum dan berbagai konsentrasi substrat. PEMBAHASAN Amilase antara lain a-amilase, P-amilase, amiloglukosidase dan isoamilase adalah kelompok enzim yang dapat memecah pati menjadi gula-gula sederhana (glukosa) yang banyak digunakan dalam berbagai industri seperti industri tekstil, deterjen dan gula cair non tebu. Dalam industri pangan, a-amilase berperan dalam mempercepat proses hidrolisis pati dan menurunkan viskositas pati (Nigam dan Singh, 1995). MenurutAlam et ah, 1989, mikroorganisme dapat menghasilkan lebih dari satu macam amilase pada saat yang bersamaan. Sumber karbon dan nitrogen

365


yang disenangi oleh mikroba yaitu dengan metabolisme karbohidrat dan protein yang sederhana (Volk dan Wheeler, 1988). Mikroba Nocardia tumbuh secara aerob pada media yang sederhana dengan membentuk filamen panjang yang mudah patah menjadi sel batang dan bulat pleomorfl (bakteri yang mempunyai banyak bentuk), Gram positif dan jenis patogen (Volk dan Wheeler, 1988). Marga Nocardia termasuk yang dominan di dalam tanah dan termasuk kelompok rare actinomycetes yaitu kelompok yang jarang atau sulit ditemukan dan bersifat obligat aerob dan memiliki kemampuan memanfaatkan hidrokarbon sebagai sumber energinya. Isolat nomor 100 adalah anggota marga Streptomyces meliputi kelompok organisme yang sangat besar yang tersebar di seluruh dunia. Streptomyces sangat fleksibel dalam penggunaan nutrien. Bakteri ini tidak memerlukan faktor tumbuh yang khusus; berbagai macam sumber karbon dapat digunakan. Seperti Aktinomisetes lainnya, mikroba ini tumbuh sebagai filamen panjang bercabang, tidak seperti anggota marga Nocardia mikroba ini membentuk rantai panjang spora udara yang disebut konidia. Anggota marga Streptomyces sangat jarang bersifat patogen, tetapi mikroba ini telah mencapai ketenaran karena kemampuannya untuk memproduksi antibiotika. Streptomisin dan aktinomisin adalah yang pertama diisolasi dan dikarakterisasi dari mikroba yang diklasifikasi sebagai Streptomyces (Madigan et al, 2003). Sebagai medium produksi a-amilase dapat digunakan berbagai macam sumber karbohidrat seperti tepung jagung (maizena), kentang, singkong, sagu, ubi jalar, dedak, gandum, dedak beras serta sumber karbohidrat lainnya. Pengaruh berbagai jenis tepung komersial untuk Nocardia no.7 menunjukkan bahwa dari pati terlarut dan maizena merupakan substrat karbon yang sangat baik. Pada penelitian Bansode (2010) pati terlarut merupakan sumber karbon yang sangat baik sebagai zat makanan untuk bakteri. Bacillus cereus hasil seleksi dari brem bali menghasilkan amilase sebesar 377,50 x 102 U/ml/menit setelah diinkubasi selama 44 jam dalam media tepung ketan pH 7 pada suhu50°C(Naiola,2001). Enzim berfiingsi secara optimal pada suhu dan

366

pH tertentu, sehingga penyimpangan-penyimpangan dari keadaan optimum mengakibatkan berkurangnya aktivitas enzim dengan nyata. Hal ini khas bagi semua enzim. Keragaman pH yang ekstrim bahkan dapat merusak enzim, seperti juga suhu yang tinggi, pendidihan selama beberapa menit akan mendenaturasikan (menghancurkan) kebanyakan enzim. Nocardia no. 7 menghasilkan aktivitas tertingginya pada pH 7,5 dan 8,0 dengan suhu inkubasi 40°C, sedangkan aktivitas maksimum dari Saccharomyces cerevisiae W3O3A rekombinan dicapai pada pH 7,0 suhu 40°C (Thantowi et al, 2002). Tetapi dibandingkan dengan Bacillus spp. DA5.2.3 dan L5 yang diisolasi dari udang, aktivitas masing-masing sebesar 2,1 U/ml dan 0,5 U/ml diinkubasi selama 24 jam (Jamilah et al. ,2009) aktivitas dari Nocardia no. 7 masih lebih besar. Aktivitas a-amilase dari Bacillus sp. K-12 yang tertinggi didapat dari sumber karbon pati terlarut pada pH 7,5 dengan suhu inkubasi 42°C (Kiran et al, 2005). Menurut Vihinen & Manstala (1989) bahwa pH optimum amilase bervariasi dari 2-10,5, namun sebagian besar aktif dengan baik pada pH 5-8. Pada umumnya terdapat hubungan optimum antara konsentrasi enzim dan substrat bagi aktivitas maksimum. Konsentrasi substrat yang amat rendah, kecepatan reaksipun amat rendah, tetapi kecepatan ini akan meningkat dengan meningkatnya konsentrasi substrat. Laju aktivitas enzim akan meningkat dengan meningkatnya kadar substrat sampai suatu titik. Sekali enzim jenuh dengan substrat, penambahan kadar substrat tidak akan berpengaruh pada kecepatan reaksi (Volk dan Wheeler, 1988). Michaelis-Menten mendefinisikan suatu tetapan yang sekarang dinyatakan sebagai Km, yang bermanfaat dalam menyatakan hubungan yang tepat antara konsentrasi substrat dan kecepatan reaksi enzimatik. Merupakan dasar bagi semua aspek kinetika kerja enzim. Jika diketahui Km dan Vmaks maka dapat dihitung kecepatan reaksi suatu enzim pada setiap konsentrasi substrat. Unsur kunci di dalam persamaan Michaelis- Menten adalah Km yang bersifat khas bagi enzim tertentu, dengan substrat spesifik pada kondisi suhu dan pH tertentu. Nocardia no.7 memiliki karakter biokimia aktivitas a-amilase pada suhu 40°C dan pada pH 7,5


masing-masing sebesar 15,76 dan 31,11 U/ml. Nilai Km 2

dan Vmats Nocardia no. 7 masing-masing 71.10" %(b/ v) dan 7,62 U/ml/menit. Hasil dari B. cereus didapat nilai untuk Km dan Vm masing-masing 36.10 2 % dan 89,36 U/ml/menit (kondisi pH 7,0; suhu 40°C; inkubasi lOmenit). KESIMPULAN Telah diseleksi dari 41 Aktinomisetes penghasil a-amilase yang berasal dari Bangkirai, Kalimantan Timur koleksi Bidang Mikrobiologi, Pusat Penelitian Biologi-LIPI Cibinong. Didapat 2 isolat yang mempunyai aktivitas a-amilase nisbi dengan nilai sama dengan 3, yaitu Nocardia no.7 dan Streptomyces no. 100. Dalam medium yang mengandung pati terlarut, isolat Nocardia no.7 penghasil a-amilase tertinggi dibanding dari isolat Streptomyces no. 100 setelah diinkubasi 2 hari. Nocardia no.7 memiliki karakter biokimia aktivitas a-amilase pada suhu 40°C dan pada pH 7,5 masing-masing sebesar 15,76 dan 31,11 U/ml. Nilai Km dan Vmaks Nocardia no. 7 masing-masing 71 .10"2%(b/v) dan7,62U/ml/menit. UCAPAN TERIMA KASIH Diucapkan terima kasih kepada Dra Elidar Naiola atas bantuannya sehingga penelitian ini dapat terlaksana, serta saran-saran dalam penulisan makalah. DAFTARPUSTAKA Alam R, Y Teramoto dan S Hayashida. 1989. Characteristic of raw starch digestible saccharifying a-amylase from Bacillus substilis 3018. Annual Report of ICBiotech. Osaka University, Japan. Bansode SD. 2010. Screening of nutritional components for a- amylase production in submerged fermentation by Bacteria Isolated from soil using Plackett-Burman Design. International Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences 2(1), 91-98.

Bernfeld O. 1995. Amylases a & B. In: Methods in Enzymology and Related of Biochemistry 1. SP Colowick and NO Kaplan (Eds). Academic Press, New York. Jamilah I, A Meryandini, I Rusmana, A Suwanto and NR Mubarik. 2009. Activity of proteolilytic and amylolytic enzymes from Bacillus spp. isolated from shrimp ponds. J. Microbiology Indonesia 3(2), 6771. Kim CH. 1995. Characterization and substrate specificity of an endo-B-l,4-D-glucanase I (Avicelase I) from an extracellular multienzyme complex of Bacillus circulans. Appl Environ Microbial 61, 959-965. Kiran O, U Comlekcloglu and B Arihan. 2005. Effects of carbon sources and various chemicals on the production of a novel amylase from thermophillic Bacillus sp. K-12. Turk J.Biol. 29, 99-103. Madigan MT, JM Martiko and J Parker. 2003. Biology of Microorganisms. Tenth Edition. Pearson Education, Inc. USA. Mangunwardoyo W, M Takano and I Shibasaki. 1982. Preservation and Utilization of a Concentrated Seed Culture for Bacterial Amylase Production. Annual Reports of ICME 5, Osaka University, Osaka, Japan. Naiola E. 2001. Karakterisasi amilase dari isolat bakteri yang berasal dari Bali dan Lombok. Jurnal Biologi Indonesia 3(1), 32-42. Nigam P and D Singh. 1995. Enzyme and microbial system involved in starch processing. Enzyme Microb Technol 17, 770-778. Nikolov Z and PJ Reilly. 1993. Enzymatic depolymerization of starch. In: JS Dordick (Ed.). Biocatalysists for Industry, 37-62. Plenum, New York. Nurkanto A. 2007. Identifikasi aktinomisetes tanah hutan pasca-kebakaran Bukit Bangkirai, Kalimantan Timur dan potensinya sebagai pendegradasi selulosa dan pelarut fosfat. J. Biodiversitas 8(4), 314-319. Nurkanto A, M Rahmansyah dan A Kanti, 2008. Teknik lsolasi Aktinomisetes. LIPI-Press. Sadikin M. 2002. Biokimia Enzim. Widya Medika, Jakarta.. Thontowi A, Puspaningsih, S Hadi, Purkan, Ni'mahtuzahroh dan B Irawan. 2002. Pencirian produksi amilase oleh Saccharomyces cerevisiae W303A rekombinan. J. Biologi Indonesia 3(3), 169174. Vihinen M and P Manstala. 1989. Critical Reviews in Biochemistry and Moleculer Biology 24, issue 4. Departement of Biochemistry. University of Turku. Turku. Volk WA and MF Wheeler. 1988. Mikrobiologi Dasar. Jilid 1. S Adisoemarto (Ed.). Erlangga, Jakarta. Terjemahan dari Basic Microbiology 5* Ed.

367

OPTIMASI DAN KARAKTERISASI A-AMILASE DARIISOLAT

Recommend Documents