PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI PLAGIAT

PLAGIAT PLAGIATMERUPAKAN MERUPAKANTINDAKAN TINDAKANTIDAK TIDAKTERPUJI TERPUJI

DAYA ANTIBAKTERI MINYAK ATSIRI DAUN KEMANGI (Ocimum basilicum L.) SEBAGAI ZAT AKTIF DAN SEDIAAN GEL TERHADAP Staphylococcus epidermidis ATCC 12228 DAN Bacillus subtilis ATCC 6633

SKRIPSI Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S. Farm.) Program Studi Farmasi

Oleh: Marsela Lotjita Parahita NIM : 098114062

FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS SANATA DHARMA YOGYAKARTA 2013

i


DAYA ANTIBAKTERI MINYAK ATSIRI DAUN KEMANGI (Ocimum basilicum L.) SEBAGAI ZAT AKTIF DAN SEDIAAN GEL TERHADAP Staphylococcus epidermidis ATCC 12228 DAN Bacillus subtilis ATCC 6633

SKRIPSI Diajukan untuk Memenuhi Salah Satu Syarat Memperoleh Gelar Sarjana Farmasi (S. Farm.) Program Studi Farmasi

Oleh: Marsela Lotjita Parahita NIM : 098114062

FAKULTAS FARMASI UNIVERSITAS SANATA DHARMA YOGYAKARTA 2013

ii


iii


iv


---- MAHATMA GANDHI----

This thesis IS Dedicated to: Jesus christ Mother mary My late dad: IGN. SUKASWORO My wonderful mom: C. SARTINI] My sisters: ima, ika, dita And my almamater

v


vi


vii


PRAKATA

Puji dan syukur penulis haturkan kepada Tuhan yang Maha Esa atas berkat dan rahmat-Nya, sehingga penulis dapat menyelesaikan laporan penelitian yang berjudul “Daya Antibakteri Minyak Atsiri Daun Kemangi (Ocimum basilicum L.) Sebagai Zat Aktif dan Sediaan Gel Terhadap Staphylococcus epidermidis ATCC 12228 dan Bacillus subtilis ATCC 6633” ini untuk memenuhi salah satu syarat untuk memperoleh gelar Sarjana Farmasi (S. Farm) di Fakultas Farmasi, Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta. Selesainya penulisan laporan penelitian ini, tidak terlepas dari bantuan baik berupa bimbingan, dukungan, sarana, maupun finansial dari berbagai pihak. Oleh karena itu, dengan rendah hati penulis ingin mengucapkan terima kasih kepada: 1. Ipang Djunarko, M.Sc., Apt. selaku Dekan Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta. 2. C. M. Ratna Rini Nastiti, M.Pharm., Apt. selaku Dosen Pembimbing yang telah memberikan pengarahan, masukan, kritik, saran dan semangat selama persiapan, penelitian, sampai penyusunan skripsi ini. 3. Rini Dwiastuti, M.Sc., Apt., selaku Dosen Penguji yang telah memberikan waktu, kesempatan, masukan dan bimbingan selama kuliah maupun selama penyelesaian skripsi ini.

viii


4. Yohanes Dwiatmaka, M.Si., selaku Dosen Penguji yang telah memberikan waktu, kesempatan, masukan dan bimbingan selama kuliah maupun selama penyelesaian skripsi ini. 5. Seluruh dosen Fakultas Farmasi, Universitas Sanata Dharma, yang telah memberikan ilmu selama penulis menempuh pendidikan di Fakultas Farmasi. 6. Seluruh staf laboratorium, staf kebersihan, dan staf keamanan Fakultas Farmasi, Universitas Sanata Dharma, Yogyakarta. Terutama Pak Mukminin, Pak Wagiran, Mas Sigit, Pak Musrifin, Mas Agung, Pak Parlan, Pak Yuwono yang telah banyak membantu kelancaran penulis dalam melakukan penelitian. 7. Agustina Prita Pangudyaswara, Fitri Apriliyani Tiran, dan Putu Eny Guna Pramita, selaku teman seperjuangan skripsi atas kerjasama, semangat dan masukan yang diberikan. 8. Teman-teman „Gosipol‟, Agustina Erni Purnamasari, Christina Yessy Jessica, F. Eky Suprabawati, Katherine Jessica Ariani, Bernadhea Wikan Pangesti, Diah Intan Sari, Yenny atas persahabatan, semangat, dan kekompakan selama 4 tahun ini. 9. Teman-teman FKK B 2009, FSM B 2009, Kelompok praktikum C 2009, atas kebersamaan, kerjasama dan kenangan selama di Fakutas Farmasi. 10. Semua pihak yang tidak dapat disebutkan satu per satu yang telah membantu penulis dalam menyelesaikan pendidikan di perguruan tinggi ini. Penulis menyadari bahwa masih banyak kekurangan dalam penyusunan skripsi ini, sehingga kritik dan saran yang membangun sangat dibutuhkan penulis

ix


menuju perubahan yang lebih baik. Semoga skripsi ini dapat bermanfaat bagi pembaca pada khususnya dan ilmu pengetahuan pada umumnya.

Penulis

x


DAFTAR ISI HALAMAN SAMPUL .................................................................................

i

HALAMAN JUDUL ....................................................................................

ii

HALAMAN PERSETUJUAN PEMBIMBING ............................................

iii

HALAMAN PENGESAHAN .......................................................................

iv

HALAMAN PERSEMBAHAN ....................................................................

v

PERNYATAAN KEASLIAN KARYA ........................................................

vi

LEMBAR PERNYATAAN PERSETUJUAN PUBLIKASI..........................

vii

PRAKATA ................................................................................................... viii DAFTAR ISI ................................................................................................

xi

DAFTAR TABEL ........................................................................................

xv

DAFTAR GAMBAR .................................................................................... xvi DAFTAR LAMPIRAN ................................................................................. xvii INTISARI ..................................................................................................... xviii ABSTRACT ................................................................................................... xix BAB I PENGANTAR ...................................................................................

1

A. Latar Belakang ............................................................................

1

B. Perumusan Masalah .....................................................................

4

C. Keaslian Penelitian ......................................................................

4

D. Manfaat Penelitian .......................................................................

5

1. Manfaat teoretis .....................................................................

5

2. Manfaat praktis ......................................................................

5

E. Tujuan Penelitian.........................................................................

5

xi


BAB II PENELAAHAN PUSTAKA ............................................................

6

A. Bau Kaki ....................................................................................

6

B. Staphylococcus epidermidis .......................................................

7

C. Bacillus subtilis..........................................................................

7

D. Uji Daya Antibakteri ..................................................................

8

E. Minyak Atsiri Daun Kemangi ....................................................

9

F. Destilasi Minyak Atsiri ..............................................................

11

G. Gel .............................................................................................

12

H. Landasan Teori ..........................................................................

13

I. Hipotesis ....................................................................................

15

BAB III METODOLOGI PENELITIAN ......................................................

16

A. Jenis dan Rancangan Penelitian ..................................................

16

B. Variabel dan Definisi Operasional ..............................................

16

1. Variabel penelitian ...............................................................

16

2. Definisi operasional .............................................................

16

C. Bahan Penelitian ........................................................................

17

D. Alat Penelitian ...........................................................................

17

E. Tata Cara Penelitian ...................................................................

18

1. Identifikasi tanaman kemangi ...............................................

18

2. Pengumpulan daun kemangi .................................................

18

3. Destilasi minyak atsiri daun kemangi ...................................

18

4. Karakterisasi minyak atsiri daun kemangi ............................

19

xii


5. Identifikasi kualitatif minyak atsiri daun kemangi dengan metode KLT .....................................................................................

20

6. Penyiapan media uji .............................................................

20

7. Uji daya antibakteri minyak atsiri daun kemangi dengan metode difusi sumuran......................................................................

20

8. Penentuan nilai KHM dan KBM dengan dilusi padat ............

22

9. Pembuatan gel anti bau kaki minyak atsiri daun kemangi .....

24

10. Uji sifat fisik sediaan gel anti bau kaki minyak atsiri daun kemangi ...............................................................................

25

11. Uji daya antibakteri sediaan gel anti bau kaki minyak kemangi terhadap Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis dengan metode difusi sumuran .........................................................

26

F. Analisis Data .............................................................................

26

BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN .......................................................

28

A. Identifikasi Daun Kemangi ........................................................

27

B. Penyiapan Bahan Daun Kemangi ...............................................

27

C. Destilasi Minyak Atsiri Daun Kemangi ......................................

27

D. Karakterisasi Minyak Atsiri Daun Kemangi ...............................

29

E. Uji Daya Antibakteri Minyak Atsiri Daun Kemangi terhadap Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis .......................

32

F. Penentuan nilai KHM dan KBM Minyak Atsiri Daun Kemangi .

38

G. Formulasi Sediaan Gel Anti Bau Kaki Minyak Atsiri Daun Kemangi ..................................................................................................

xiii

41


H. Uji Sifat Fisik Sediaan Gel Anti Bau Kaki .................................

44

I. Uji daya antibakteri Sediaan Gel Anti Bau Kaki Minyak Atsiri Daun Kemangi terhadap Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis ..................................................................................................

47

BAB V KESIMPULAN DAN SARAN ........................................................

50

A. Kesimpulan ................................................................................

50

B. Saran..........................................................................................

50

DAFTAR PUSTAKA ...................................................................................

51

LAMPIRAN .................................................................................................

54

BIOGRAFI PENULIS ..................................................................................

85

xiv


DAFTAR TABEL Tabel I.

Formula sediaan gel anti bau kaki minyak atsiri daun kemangi ....

25

Tabel II. Hasil uji 𝜒 ± SD diameter zona hambat minyak atsiri daun kemangi terhadap Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis ............

33

Tabel III. Hasil uji distribusi normal data diameter zona daya hambat variasi konsentrasi minyak atsiri daun kemangi terhadap Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis ...................................................

36

Tabel IV . Hasil post hoc test diameter zona daya hambat variasi konsentrasi minyak atsiri daun kemangi terhadap Staphylococcus epidermidis

37

Tabel V. Hasil post hoc test diameter zona daya hambat variasi konsentrasi minyak atsiri daun kemangi terhadap Staphylococcus epidermidis

37

Tabel VI. Hasil uji KHM dan KBM minyak atsiri daun kemangi terhadap Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis ..........................

38

Tabel VII. Data hasil pengukuran viskositas dan daya sebar ..........................

45

Tabel VIII. Hasil 𝜒 ± SD pengukuran diameter zona hambat sediaan gel anti bau kaki terhadap Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis ...

46

Tabel IX. Hasil uji distribusi normal data diameter zona hambat gel minyak atsiri daun kemangi terhadap Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis ..........................................................................................

47

Tabel X. Hasil post hoc test diameter zona hambat gel minyak atsiri daun kemangi terhadap Staphylococcus epidermidis ..............................

47

Tabel XI. Hasil post hoc test diameter zona daya hambat gel minyak atsiri daun kemangi terhadap Bacillus subtilis ................................................

xv

48


DAFTAR GAMBAR

Gambar 1. Morfologi tanaman kemangi .......................................................

9

Gambar 2. Daun kemangi ............................................................................

27

Gambar 3. Minyak atsiri daun kemangi ........................................................

28

Gambar 4. Profil kromatografi lapis tipis .....................................................

31

Gambar 5. Grafik konsentrasi vs diameter zona hambat minyak atsiri daun kemangi terhadap Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis ..................................................................................................

34

Gambar 6. Sediaan gel anti bau kaki minyak atsiri daun kemangi ................

43

xvi


DAFTAR LAMPIRAN Lampiran 1. Pengesahan Surat Determinasi ..................................................

54

Lampiran 2. Surat keterangan Staphylococcus epidermidis ...........................

55

Lampiran 3. Surat keterangan Bacillus subtilis ..............................................

56

Lampiran 4. Data rendemen destilat minyak atsiri daun kemangi ..................

57

Lampiran 5. Data karakterisasi minyak atsiri daun kemangi ..........................

57

Lampiran 6. Uji daya antibakteri minyak atsiri daun kemangi terhadap Staphylococcus epidermidis .......................................................

58

Lampiran 7. Uji daya antibakteri minyak atsiri daun kemangi terhadap Bacillus subtilis .......................................................................................

59

Lampiran 8. Penentuan nilai KHM dan KBM Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis..........................................................................

60

Lampiran 9. Sediaan gel anti bau kaki minyak atsiri daun kemangi ...............

63

Lampiran 10. Uji aktivitas antibakteri gel anti bau kaki minyak atsiri daun kemangi .....................................................................................

64

Lampiran 11. Pengukuran pH sediaan gel anti bau kaki minyak atsiri daun kemangi .....................................................................................

66

Lampiran 12. Pengukuran uji sifat fisik sediaan gel minyak atsiri daun kemangi ..................................................................................................

66

Lampiran 13. Hasil perhitungan-perhitungan statistik ...................................

66

xvii


INTISARI Minyak kemangi (Ocimum basilicum L.) memiliki daya antibakteri terhadap bakteri penyebab bau pada kaki. Eugenol adalah senyawa di daun kemangi yang mempunyai aktivitas sebagai antibakteri. Tujuan penelitian ini adalah untuk mengetahui daya antibakteri minyak kemangi dan gel minyak kemangi dalam menghambat bakteri Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis. Penelitian ini merupakan penelitian eksperimental murni dengan rancangan penelitian acak lengkap pola searah. Tahapan penelitian meliputi uji daya antibakteri minyak atsiri daun kemangi terhadap beberapa variasi konsentrasi dengan difusi sumuran; dilanjutkan dengan penentuan nilai KHM dan KBM dengan dilusi padat, dan pengujian daya antibakteri gel minyak kemangi. Data yang diperoleh dianalisis menggunakan uji normalitas Shapiro Wilk, dilanjutkan dengan uji Kruskal-Wallis dan uji Wilcoxon menggunakan program R 2.14.1. Berdasarkan hasil penelitian, minyak kemangi mempunyai kemampuan menghambat bakteri Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis. Nilai KHM dan KBM minyak atsiri daun kemangi terhadap Staphylococcus epidermidis berturut-turut adalah 2% v/v dan 2.5% v/v, dan terhadap Bacillus subtilis, yaitu berturut-turut 2%v/v dan 2.5% v/v. Daya antibakteri gel minyak kemangi dan minyak kemangi 15% tidak berbeda bermakna. Kata kunci: minyak kemangi, Staphylococcus epidermidis, Bacillus subtilis, gel, antibakteri

xviii


ABSTRACT Basil oil (Ocimum basilicum L.) has antibacterial power against odorcausing bacteria on the feet. Eugenol in basil leaves is compound that has an activity as an antibacterial antibacterial activity. The aim of this study was to determine the antibacterial gel basil oil and basil oil in inhibiting the bacteria Staphylococcus epidermidis and Bacillus subtilis. This study was an experimental study design which had one way complete random design. Research began with a study of antibacterial activity of essential oils of basil leaves on some variation of the concentration with diffusion wells; followed by determination of MIC and MBC values with solid dilution; gel of basil leave oils has also tested in terms of antibacterial activity against Staphylococcus epidermidis and Bacillus subtilis. Data were analyzed using the Shapiro Wilk normality test, followed by Kruskal-Wallis test and Wilcoxon test by using R 2.14.1 program. The research result of basil oil had the ability to inhibit the bacteria Staphylococcus epidermidis and Bacillus subtilis. MIC and MBC values of basil essential oils against Staphylococcus epidermidis that are 2% v/v and 2.5% v/v, and against Bacillus subtilis that are 2% v/v and 2.5% v/v. Antibacterial activity of gel basil oil and 15% basil oil was not significantly different. Keywords: basil oil, Staphylococcus epidermidis, Bacillus subtilis, gel, antibacteria

xix


BAB I PENGANTAR A. Latar Belakang Indonesia memiliki iklim tropis yang panas dan lembab sepanjang tahun. Keadaan yang seperti ini dapat menyebabkan timbulnya keringat yang berlebih, dan menimbulkan bau tak sedap pada tubuh yang mempunyai banyak kelenjar keringat. Keringat pada dasarnya tidak berbau dan mudah menguap, namun, di daerah-daerah tertentu tidak selalu mudah menguap, seperti di ketiak dan kaki. Hal ini dapat memicu pertumbuhan bakteri yang dapat menguraikan keringat membentuk senyawa yang menghasilkan bau tak sedap. Bromhidrosis atau bau badan yang tidak enak paling sering disebabkan karena adanya keringat yang berlebih dari kelenjar keringat eccrine atau apocrine, yang kemudian akan menyebabkan pertumbuhan bakteri yang berlebihan di kulit. Kelenjar keringat apocrine terletak di ketiak, sedangkan kelenjar keringat eccrine ada yang terletak di kaki (Jacknin, 2001). Permukaan tubuh yang bau dapat ditimbulkan oleh keringat, sebum, dan sel-sel kulit mati yang telah diuraikan oleh bakteri menjadi senyawa berbau (Prabowo dkk., 2012). Bromhidrosis di kaki yang terjadi ketika kulit menebal, dalam keadaan panas, atau dalam keadaan basah dapat menjadi tempat tumbuh yang baik untuk bakteri. Bakteri akan merusak lapisan paling atas dari sel kulit dan sel keringat, kemudian membentuk senyawa kimia yang menghasilkan bau tak enak (Jacknin, 2001). Beberapa bakteri yang diduga dapat menjadi penyebab bau badan ialah bakteri Staphylococcus epidermidis, Cornybacterium acne, Pseudomonas

1


2

aeruginosa dan Streptococcus pyrogenes (Endarti, Yulinah, dan Soediro, 2002). Selain itu, bau pada kaki dapat disebabkan oleh fungi Candida albicans dan bakteri Staphylococcus aureus (Tierno, 2001). Bacillus subtilis merupakan salah satu spesies flora normal yang banyak ditemukan di kulit. Golongan bakteri Bacillus sp. diketahui mempunyai peranan penting sebagai penyebab bau kaki. Bacillus subtilis memegang peranan sebesar 11,5% dalam menyebabkan bau kaki, sedangkan Staphylococcus epidermidis memegang peranan 86,5% (Ara dkk., 2006). Staphylococcus epidermidis merupakan suatu flora normal di kulit manusia yang mampu menimbulkan infeksi pada kulit atau jaringan lunak (Jawetz, Melnick, dan Adelberg, 1996). Bakteri Staphylococcus epidermidis pada kulit akan mendegradasi asam amino leucine menjadi isovaleric acid. Ketika sel bakteri di kulit berkembangbiak di keringat, bakteri akan memecah beberapa protein di keringat (Pommerville, 2011). Masalah bau kaki ini melibatkan beberapa spesies bakteri, dan dua bakteri yang termasuk adalah Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis. Staphylococcus epidermidis merupakan bakteri mayoritas di kulit, sehingga peran bakteri ini dalam menyebabkan bau kaki cukup tinggi. Bacillus subtilis merupakan bakteri yang memiliki enzim leucine dehydrogenase paling tinggi, sehingga mampu menimbulkan bau kaki yang paling menyengat (Ara dkk., 2006). Mekanisme terjadinya bau kaki adalah karena timbulnya keringat dari kelenjar eccrine yang mengandung kandungan organik seperti asam amino leusin. Bakteri di kaki yang mempunyai enzim pendegradasi leucine dehydrogenase akan


3

mendegradasi asam amino leusin di keringat menjadi isovaleric acid, yaitu suatu volatile lower fatty acids yang merupakan senyawa berbau. Bakteri yang mempunyai banyak enzim leucine dehydrogenase akan menimbulkan bau yang sangat menyengat (Ara dkk., 2006). Minyak atsiri yang banyak di alam Indonesia memegang peranan bagi kesehatan. Di Indonesia, penggunaan minyak atsiri dapat melalui beberapa cara, yaitu melalui mulut (oral), pemakaian luar (topikal), pernapasan (inhalasai atau kemoterapi), dan pestisida nabati (Kardinan, 2005). Bagian dari tanaman kemangi (Ocimum basilicum L.) yang banyak digunakan adalah daunnya. Dalam penggunaannya, daun kemangi sering disuling dan diambil kandungan minyak atsirinya (Dzulkarnain dan Wahjoedi, 1996). Minyak atsiri kemangi mempunyai kandungan senyawa dominan seperti linalool, methylclavicol (estragol),

1-8 sineol,

eugenol,

terpineol,

geraniol(1,6,7)

(Sastroamidjojo, 2001). Senyawa kimia dalam minyak atsiri, yaitu eugenol, linalool (Knolbloch et al. cit., Hadipoentyanti dan Sri, 2008) dan metil eugenol dapat bersifat sebagai anti bakteri. Eugenol adalah senyawa turunan fenol yang dapat berfungsi sebagai bakteriostatik terhadap fungi maupun bakteri. Eugenol dapat mengganggu struktur lipid bilayer membran luar bakteri, memecah lipid dan mitokondria, serta menyebabkan kebocoran protein membran sel bakteri (Winarsih, Onggung, dan Septiana, 2010). Pembuatan minyak atsiri daun kemangi ke dalam bentuk sediaan gel anti bau kaki diduga mempunyai afinitas bahan aktif dengan basis sediaan yang


4

berbeda, sehingga mempengaruhi pelepasan zat aktif dari basis yang akan mempengaruhi pelepasan bahan aktif dari basis yang mempengaruhi efektivitas sediaan gel menghambat pertumbuhan bakteri penyebab bau pada kaki.

1. Perumusan masalah 1) Apakah minyak atsiri daun kemangi mempunyai daya antibakteri terhadap Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis? 2) Bagaimanakah daya hambat minyak atsiri daun kemangi dan gel minyak atsiri daun kemangi terhadap Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis?

2. Keaslian penelitian Dewi (2008), melaporkan bahwa minyak atsiri daun kemangi mempunyai aktifitas antifungi terhadap Malassezia furfur dengan konsentrasi terendah adalah 6,25% (v/v). Komponen yang dimungkinkan berperan adalah golongan terpenoid. Berdasarkan penelitian Maryati, Ratna, dan Triastuti (2007), tanaman Ocimum basilicum L. mempunyai aktivitas antibakteri terhadap bakteri Staphylococcus aureus dan Escherichia coli dengan nilai KBM berturut-turut adalah 0,5% v/v dan 0,25% v/v. Penelitian Lertsatitthanakorn dan Satayavongthip (2012), membahas tentang formulasi gel kaki deodoran dari minyak cinnamon yang dapat dijadikan salah satu alternatif kosmetik yang dapat menurunkan bakteri penyebab bau kaki.


5

Sejauh penelusuran pustaka yang dilakukan oleh penulis, penelitian tentang “Daya Antibakteri Minyak Atsiri Daun Kemangi (Ocimum basilicum L.) Sebagai Zat Aktif dan Sediaan Gel Terhadap Staphylococcus epidermidis ATCC 12228 dan Bacillus subtilis ATCC 6633” belum pernah dilakukan.

3. Manfaat penelitian a. Manfaat teoretis Menambah informasi ilmu pengetahuan, khususnya dalam bidang farmasi, mengenai pengembangan dan pemanfaatan tanaman obat tradisional yang kandungannya berkhasiat sebagai antibakteri.

b. Manfaat praktis Sebagai salah satu alternatif untuk mengurangi bau di kaki dengan menghambat bakteri Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis menggunakan minyak atsiri daun kemangi.

B. Tujuan Penelitian a. Memastikan minyak atsiri daun kemangi mempunyai daya antibakteri terhadap Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis. b. Jika minyak atsiri daun kemangi mempunyai daya antibakteri, maka digunakan untuk mengetahui daya hambat minyak atsiri daun kemangi dan formula gel minyak atsiri daun kemangi terhadap Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis.


BAB II PENELAAHAN PUSTAKA

A. Bau Kaki Bau kaki disebut juga bromohidrosis, sedangkan kaki berkeringat disebut hiperhidrosis. Bau kaki terutama disebabkan oleh keringat. Menurut Toselli, (2005), terdapat sekitar 250.000 kelenjar keringat di kaki yang lebih banyak dibandingkan dengan bagian tubuh yang lainnya. Keringat di kaki sebenarnya tidak berbau keluar, sama seperti keringat di ketiak atau di tempat lain. Tetapi, bakteri di permukaan kaki mengolah keringat dan timbullah bau, ditambah sepatu dan kaus kaki yang menciptakan lingkungan yang gelap dan lembap yang memungkinkan bakteri berkembang subur (Leyner and Goldberg, 2006). Terdapat dua jenis kelenjar keringat yaitu kelenjar keringat eccrine dan apocrine. Kelenjar keringat apocrine dapat ditemukan di ketiak, areola mammae, dan di bagian alat kelamin, sedangkan kelenjar keringat eccrine dapat ditemukan di seluruh tubuh termasuk di kaki. Keringat eccrine sebagian besar terdiri dari air tetapi juga mengandung sodium klorida, asam laktat dan urea dalam jumlah yang kecil. Keringat ini pada dasarnya tidak berbau tajam, tetapi dapat menjadi bau yang tidak enak karena disebabkan oleh bakteri yang ada di kulit. Pada awalnya telah diketahui bahwa penyebab bau pada kaki adalah rantai asam lemak dari pelargonic acid dan caproic acid, namun belakangan diketahui bahwa penyebab bau pada kaki, yaitu isovaleric acid (Elsevier, 1997). Zat kimia yang paling banyak berada di kaki adalah asam isovalerat yang merupakan karakteristik dari adanya bau kaki. Intensitas bau kaki sebanding

6


7

dengan intensitas asam isovalerat. Bau tak sedap dari kaki dapat diinkubasi dari keringat tubuh dan lipid dari bakteri. Kelenjar keringat eccrine adalah sumber nutrisi utama di kaki dan dapat menjadi nutrisi pula untuk pertumbuhan bakteri (Kanda et al., cit., Toller and Dodd, 1992).

B. Staphylococcus epidermidis Bakteri Staphylococcus epidermidis merupakan bakteri Gram-positif, koloni berwarna putih atau kuning, dan bersifat anaerob fakultatif. Bakteri ini tidak mempunyai lapisan protein A pada dinding sel, dapat meragi laktosa, tidak meragi manitol, dan bersifat koagulase negatif. Staphylococcus epidermidis dapat menyebabkan infeksi kulit ringan yang disertai dengan pembentukan abses. Staphylococcus epidermidis biotipe-1 dapat menyebabkan infeksi kronis pada manusia (Radji, 2010). Staphylococcus epidermidis merupakan suatu flora normal di kulit manusia yang termasuk dalam stafilokokus nonhemolitik aerob dan anaerob serta koagulase negatif. Bakteri aerob dan anaerob seringkali bersama-sama menimbulkan infeksi yang sinergis pada kulit atau jaringan lunak. Koloni S. epidermidis berwarna abu-abu sampai putih pada isolasi pertama. Banyak koloni membentuk pigmen hanya bila telah lama dieramkan (Jawetz, Melnick, dan Adelberg, 1996).

C. Bacillus subtilis Bacillus subtilis adalah bakteri Gram positif yang membentuk endospora yang tahan terhadap kondisi lingkungan yang tidak menguntungkan, dan


8

berbentuk batang. Merupakan bakteri yang motil dengan flagela dan bersifat aerobik (Devine, 2000). Bacillus subtilis diketahui terdapat pada kulit dan dapat menimbulkan bau yang kuat pada kaki dan dapat meningkat pada saat terjadi bau pada kaki. Menurut Takemura et al., bahwa bau tidak enak disebabkan oleh Bacillus subtilis yang didukung dengan adanya isobutyric acid, isovaleric acid dan 2methylbutyric acid. Isovaleric acid diprediksikan diproduksi di kulit ketika asam amino leusin yang ada dalam keringat dimetabolisme oleh mikroorganisme normal di kulit, yaitu salah satunya oleh Bacillus subtilis (Ara et al., 2006).

D. Uji Daya Antibakteri Uji daya antibakteri dapat dilakukan menggunakan dua cara, yaitu: 1. Metode difusi Prinsip berdasarkan

metode difusi adalah pengukuran potensi antibakteri pengamatan

diameter

daerah

hambatan

bakteri

karena

berdifusinya obat dari titik awal pemberian ke daerah difusi. Pada metode difusi ini digunakan paper disk, lubang sumuran, atau silinder tak beralas yang mengandung senyawa antibakteri di atas media yang diinkubasi pada suhu 37C selama 18-24 jam. Setelah penginkubasian didapatkan diameter hambatan jernih sebagai daya antibakteri (Jawetz, Melnick, and Adelberg, 1996). 2. Metode dilusi Masing-masing konsentrasi larutan uji ditambahkan suspensi bakteri dalam media cair yang kemudian diinkubasi dan diamati pertumbuhan bakteri


9

uji berdasarkan kekeruhan media. Media yang kekeruhannya paling tipis merupakan media dengan konsentrasi yang dapat menghambat pertumbuhan bakteri. Potensi antibakteri dapat ditentukan dengan melihat konsentrasi terendah yang dapat menghambat bakteri (McKane dan Kandel, 1996).

E. Minyak Atsiri Daun Kemangi Minyak atsiri merupakan salah satu jenis minyak nabati yang multimanfaat. Minyak atsiri berupa cairan kental yang dapat disimpan pada suhu ruangan. Minyak atsiri dapat diperoleh dari berbagai tanaman seperti daun, bunga, buah, biji, kulit biji, batang, akar, atau rimpang. Ciri dari minyak atsiri adalah mudah menguap dan beraroma khas (Syahbana, 2010). Minyak atsiri daun kemangi adalah minyak esensial yang berasal dari tanaman kemangi (Ocimum basilicum L.) yang termasuk famili Lamiaceae (mint family) (Mars, 2007).

Gambar 1. Morfologi tanaman kemangi (McGuire, 2012).


10

1. Deskripsi tanaman daun kemangi Klasifikasi tanaman Ocimum basilicum L. menurut Kartesz (2013): Kerajaan

: Plantae

Subkerajaan

: Tracheobionta

Superdivisi

: Spermatophyta

Divisi

: Magnoliophyta

Kelas

: Magnoliopsida

Subkelas

: Asteridae

Orde

: Lamiales

Suku

: Lamiaceae

Genus

: Ocimum L.

Spesies

: Ocimum basilicum L.

Sinonim

: Ocimum americanum L., Ocimum album L., Basilicum

citratum

Rumph,

Ocimum

menthaefolium Hochst (Seidemann, 2005). Nama daerah

: Solasih (Sunda); telasih (Jawa); dan amping, kukuru (Minahasa) (Agromedia, 2008).

Kemangi merupakan tanaman berupa semak dengan tinggi mencapai 60 cm dengan batang berkayu, berbentuk bulat, dan bercabang. Daun tunggal, berbentuk bulat telur, dengan panjang 1-5 cm, dan letaknya berhadapan. Bunga berbentuk malai, daun pelindung berbentuk elips, dan berwarna hijau. Kelopak bunga berbentuk ginjal dan berambut. Benang sari berwarna kuning, sedangkan kepala sari berwarna kuning kecokelatan. Putik bercabang dua,


11

berwarna ungu dan kepala putik berwarna putih. Mahkota bunga berbibir dua dan berwarna putih (Agromedia, 2008). Kegunaan daun kemangi, yaitu dapat dimanfaatkan untuk mengobati bau badan dan bau keringat, bau mulut, badan lesu, ejakulasi primer, peluruh gas perut, peluruh haid, peluruh ASI, panas dalam dan sariawan (Hariana, 2008). Minyak atsiri daun kemangi mengandung 1,8-cineole, eugenol, limonene, ocimene, geranial, cis-3-hexenol, citronellol, alpha-terpineol, camphor, methyleugenol, methyl cinnamate, dan linalool (Khare, 2004).

2. Deskripsi minyak atsiri daun kemangi Minyak atsiri daun kemangi dapat dimanfaatkan untuk menghilangkan bau badan dan bau mulut. Minyak atsiri daun kemangi banyak digunakan sebagai bahan campuran pembuatan obat ataupun untuk perawatan tubuh seperti sabun mandi, parfum, body lotion, minyak gosok, dan permen pelega tenggorokan (Putriyanti dkk., 2009). Menurut Khare (2004), minyak atsiri daun kemangi (Ocimum basilicum) mempunyai aktivitas antibakteri dari Bacillus subtilis dan Staphylococcus sp.. Senyawa yang ditemukan dapat sebagai antibakteri adalah eugenol. Kandungan bahan aktif utama dari minyak atsiri daun kemangi adalah eugenol yaitu berkisar 30-46% (Kardinan, 2005).

F. Destilasi Minyak Atsiri Terdapat tiga cara yang biasa dilakukan untuk mengambil komponen minyak atsiri, yaitu destilasi, ekstraksi memakai pelarut dan pengaliran udara atau aerasi (Robinson, 1995). Cara yang lazim digunakan untuk mendapatkan minyak


12

atsiri adalah dengan penyulingan (Kardinan, 2005). Destilasi atau penyulingan adalah proses pemisahan komponen yang berupa cairan atau padatan dari dua macam campuran, berdasarkan titik uapnya dan proses ini dilakukan terhadap minyak atsiri yang tidak larut air (Guenther, 2006). Tiga jenis destilasi, yaitu: 1. Destilasi air Bahan-bahan tanaman yang didestilasi langsung terkena dasar ketel dan air. Sesuai untuk simplisia kering yang tidak rusak dengan pendidihan (Departemen Kesehatan RI, 1985). 2. Destilasi uap air Bahan tanaman berinteraksi dengan uap air panas dengan tekanan lebih dari 1 atm (Departemen Kesehatan RI, 1985). Digunakan untuh bahan yang mengandung minyak atsiri dengan titik didih tinggi (Guenther, 2006). 3. Destilasi uap dan air Bahan tanaman tidak mengalami kontak langsung dengan dasar ketel karena diletakkan dalam angsang alat destilasi (Guenther, 2006). Untuk bahan yang kering atau segar yang mungkin rusak saat pendidihan (Tyler et al., 1988). G. Gel Menurut USP, gel didefinisikan sebagai sistem semisolid yang terdiri dari dari partikel inorganik kecil atau molekul organik yang besar yang interpenetrated oleh cairan. Gel juga didefinisikan sebagai sistem yang semi rigid yang membatasi pergerakan dari medium dispers oleh jaringan ikatan tiga dimensi dari partikel atau makro partikel di medium pendispers (Troy, 2006).


13

Pembuatan gel menggunakan gelling agents yang merupakan suatu polimer yang membentuk matriks tiga dimensi karena tingginya kadar dari crosslink ketika didispersikan ke dalam pelarut. Konsentrasi gelling agent yang digunakan adalah berkisar antara 0,5% – 10%, untuk membatasi pergerakan dari medium dispers yang terjebak dalam medium pendispernya yang kemudian akan meningkatkan viskositas sediaan (Troy, 2006). Gel mempunyai lebih banyak air dibandingkan krim dan ointment. Alkohol banyak ditambahkan pada formulasi pembuatan gel, karena dengan adanya air dan alkohol banyak obat yang mudah larut. Alkohol juga berperan sebagai permeation enhancer yang membantu penetrasi obat ke dalam kulit, selain itu mempercepat pengeringan ketika diaplikasikan di kulit dan memberikan sensasi dingin (Desai, 2007). Salah satu contoh gelling agents adalah carbomer (Carbopol®) yang memiliki bobot molekul yang tinggi, sintetik, polimer yang larut dalam air dari hasil derivat acrylic acid (Desai and Mary, 2007).

H. Landasan Teori Minyak atsiri daun kemangi mengandung 1,8-cineole, eugenol, limonene, ocimene,

geranial,

cis-3-hexenol,

citronellol,

alpha-terpineol,

camphor,

methyleugenol, methyl cinnamate, dan linalool (Khare, 2004). Daun kemangi dapat dimanfaatkan untuk mengobati bau badan, bau keringat, bau mulut, badan lesu (Hariana, 2008). Senyawa kimia yang berperan sebagai antibakteri pada minyak atsiri daun kemangi adalah eugenol (Winarsih, Onggung, dan Septiana, 2010).


14

Bau kaki yang disebut juga bromohidrosis disebabkan oleh keringat yang bercampur dengan bakteri. Zat kimia yang dapat menimbulkan bau kaki adalah isovaleric acid (Toller and Dodd, 1992). Isovaleric acid adalah hasil degradasi asam amino leusin yang ada di keringat oleh bakteri yang mempunyai enzim leusine dehydrogenase (Ara et al., 2006). Staphylococcus epidermidis adalah suatu flora normal di kulit manusia yang dapat menimbulkan infeksi pada kulit (Jawetz, Melnick, dan Adelberg, 1996). Bacillus subtilis adalah salah satu penyebab bau pada kaki dengan memecah asam amino leusin menjadi isovaleric acid, penyebab bau yang tak sedap pada kaki. Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis adalah dua bakteri yang dapat menyebabkan bau yang kuat di kaki (Ara et al., 2006). Gel adalah sistem semi-rigid yang mampu menahan pergerakan dari medium dispernya dengan matriks tiga dimensi yang berasal dari medium pendispersnya (Troy, 2006). Matriks yang terbentuk berasal dari gelling agent yaitu contohnya adalah carbomer (Desai, 2007). Pengujian daya antibakteri ini bertujuan untuk melihat kemampuan minyak atsiri daun kemangi dan melihat nilai KHM dan KBM dalam menghambat bakteri penyebab bau pada kaki, serta mengetahui daya hambat minyak daun atsiri kemangi saat diformulasikan ke dalam bentuk sediaan gel.


15

I. Hipotesis 1. Minyak atsiri daun kemangi dan gel minyak atsiri daun kemangi mempunyai daya antibakteri terhadap Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis. 2. Terdapat perbedaan daya hambat antibakteri antara minyak atsiri daun kemangi dan gel minyak atsiri daun kemangi terhadap Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis.


BAB III METODOLOGI PENELITIAN

A. Jenis dan Rancangan Penelitian Penelitian ini termasuk penelitian ekperimental murni dengan rancangan penelitian acak lengkap pola searah.

B. Variabel dan Definisi Operasional 1. Variabel penelitian a. Variabel bebas adalah variasi konsentrasi minyak atsiri daun kemangi dan bentuk sediaan gel anti bau kaki. b. Variabel tergantung adalah diameter zona hambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis. c. Variabel pengacau terkendali yaitu suhu pembiakan dan inkubasi bakteri (37C), waktu inkubasi (24 jam), diameter sumuran (8mm), kepadatan suspensi bakteri uji setara dengan larutan standar Mc Farland 0,5 (konsentrasi mikroba 1,5.108 CFU/ml), paparan sinar matahari pada saat proses destilasi dan penyimpanan (fotosensitif). d. Variabel pengacau tak terkendali adalah lingkungan tempat tumbuh tumbuhan daun kemangi. 2. Definisi operasional a. Minyak atsiri daun kemangi adalah minyak nabati yang mudah menguap dan beraroma khas yang berasal dari daun kemangi (Ocimum basilicum L.). Minyak atsiri diperoleh dari hasil destilasi uap dan air dengan

16


17

meletakkan daun di atas angsang alat destilasi, sehingga tidak berkontak langsung dengan air di dasar ketel. b. Gel minyak atsiri daun kemangi adalah sediaan topikal semisolid yang mengandung bahan aktif minyak atsiri daun kemangi kadar 15% dengan pembawa senyawa hidrofilik, yaitu carbopol yang digunakan untuk mengurangi bau pada kaki sesuai dengan formula. c. Diameter zona hambat adalah parameter daya antibakteri berupa diameter area jernih yang dihasilkan agen antibakteri yang sudah dikurangi dengan diameter area jernih dari kontrol negatif dan lubang sumuran.

C. Bahan Penelitian Daun segar daun kemangi diperoleh dari Pasar Tradisional Beringharjo Yogyakarta, aquadest, etanol 96%, larutan standar Mc Farland 0.5, kultur murni Staphylococcus epidermidis ATCC 12228 dan Bacillus subtilis ATCC 6633, Mueller Hinton Agar (Merck), Mueller Hinton Broth (Merck), propilenglikol, carbopol 940, trietanolamin, natrium sulfat anhidrat, dan gel Medi-Klin® (Clindamycin phosphate 1,2%).

D. Alat Penelitian Microbiological Safety Cabinet, oven, piknometer 10 ml, hand refractometer, autoklaf, inkubator, pH meter, vortex, alat-alat gelas, ose, neraca analitik, mikropipet, pelubang sumuran no.4 (8mm), seperangkat alat destilasi, Viscotester Riot, double plate, mixer, dan penggaris (Butterfly®).


18

E. Tata Cara Penelitian 1. Identifikasi tanaman kemangi Identifikasi

tanaman

kemangi

dilakukan

di

Laboratorium

Farmakognosi Fitokimia Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta dengan mengacu pada buku panduan menurut Steenis (1975), untuk memastikan bahwa tanaman yang digunakan benar-benar tanaman kemangi. 2. Pengumpulan daun kemangi Daun kemangi diperoleh dari Pasar Tradisional Beringharjo, Yogyakarta. Bagian tanaman yang digunakan adalah bagian daun berwarna hijau yang masih segar. Daun dipisahkan dari batang dan bunga, kemudian dilakukan pencucian untuk menghilangkan kotoran yang kemungkinan masih terdapat di daun. 3. Destilasi minyak atsiri daun kemangi Destilasi uap dan air dilakukan dengan menimbang terlebih dahulu bobot daun kemangi segar, kemudian didestilasi menggunakan air selama 4-6 jam. Daun kemangi berada di atas air dengan adanya pembatas sehingga air tidak menyentuh daun kemangi secara langsung. Kemudian uap air dan minyak dialirkan melalui pendingin dan hasil destilasi ditampung. Destilat yang dihasilkan adalah berupa minyak dan air. Digunakan natrium sulfat anhidrat untuk menarik air dari hasil destilat minyak atsiri, sehingga yang didapatkan adalah minyak atsiri yang murni.


19

4. Karakterisasi minyak atsiri daun kemangi a. Pemeriksaan organoleptis Pemeriksaan organoleptis minyak atsiri dilakukan dengan melihat warna, kejernihan, dan bau minyak atsiri hasil destilasi uap dan air. Minyak kemangi memiliki warna kuning jernih, bau khas menyengat dan mudah menguap (Dewi, 2008).

b. Pengukuran nilai bobot jenis minyak kemangi Piknometer dicuci dan dibersihkan dengan air dan etanol 96%. Dikeringkan dengan arus udara kering. Menimbang piknometer yang bersih dan kering dengan seksama. Mengisi piknometer dengan air hingga penuh, lalu direndam dalam air es sehingga suhunya mencapai ± 2ºC di bawah suhu percobaan. Kemudian piknometer dikeluarkan dan dibiarkan hingga suhu piknometer mencapai suhu ruangan, kemudian pipa kapiler ditutup. Usap air yang menempel di dinding piknometer kemudian ditimbang dengan seksama. Melihat kerapatan air pada suhu percobaan. Kemudian piknometer dicuci dan dibersihkan, dan digunakan untuk menghitung kerapatan minyak atsiri daun kemangi dengan cara yang sama dengan perlakuan pada air. Di replikasi sebanyak tiga kali.

c. Pengukuran nilai indeks bias Pengukuran indeks bias menggunakan alat hand refractometer dengan menuang sampel sebanyak 1-2 tetes pada prisma dan diarahkan


20

pada cahaya terang dan dilihat dengan memutar skala sampai terlihat garis batas gelap dan terang dengan jelas.

5. Identifikasi kualitatif minyak atsiri daun kemangi dengan metode KLT Fase diam yang digunakan silika gel GF254 dan fase gerak yang digunakan untuk daun kemangi adalah n-heksana - etilasetat (10:1 v/v). Deteksi menggunakan sinar UV 254 dan 366 nm dengan penampak bercak yang digunakan adalah vanilin asam sulfat, dengan standar eugenol. 6. Penyiapan media uji Pembuatan media MHA yaitu mencampurkan serbuk MHA 34 g dalam aquadest 1000 ml. Pembuatan media MHB mencampurkan 21 g dalam aquadest 1000 ml. Kemudian disterilkan dalam autoklaf 121C pada 1 atm selama 15 menit.

7. Uji daya antibakteri minyak atsiri daun kemangi dengan metode difusi sumuran a. Penyiapan larutan uji Dari hasil destilasi dibuat berbagai variasi pengenceran dengan melarutkan minyak atsiri dengan etanol 96%. Dibuat beberapa variasi konsentrasi destilat minyak kemangi yaitu 2,5%; 5%; 10%; 15%; 20%; 50% dan 100%. Konsentrasi 100% minyak kemangi sebagai kontrol positif dan etanol 96% sebagai kontrol pelarut.


21

b. Pembuatan suspensi bakteri Diambil 1-3 ose kultur murni bakteri Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis, diinokulasikan ke dalam 10 ml MHB dan divortex serta diinkubasi 37C selama 24 jam.

Dibuat suspensi bakteri sesuai

standar Mc Farland 0,5 (1,5.108 CFU/ml).

c. Uji daya antibakteri minyak atsiri daun kemangi terhadap Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis dengan difusi sumuran Pada uji ini digunakan kontrol sterilitas media dan kontrol pertumbuhan bakteri uji. Kontrol sterilitas media ini berfungsi untuk memastikan bahwa media yang digunakan bebas dari kontaminan. Kontrol ini dibuat dengan menuang media MHA pada cawan petri steril. Sedangkan kontrol pertumbuhan uji berfungsi untuk melihat bakteri apakah suspensi bakteri yang digunakan dapat tumbuh dengan baik. Pembuatan media ini dengan menambahkan bakteri uji pada media MHA kemudian dilakukan pour plate pada cawan petri steril. Pembuatan

media

untuk

difusi

sumuran

menggunakan

perbandingan media dengan volume 1:6. Satu bagian, yaitu 5 ml digunakan sebagai layer bawah, dituang ke dalam cawan petri steril dan dibiarkan memadat terlebih dahulu. Enam bagian, yaitu 30 ml digunakan sebagai layer atas, yang dituang setelah media diinokulasi dengan bakteri uji. Pembuatan lubang sumuran pada media MHA menggunakan pelubang sumuran no. 4 dengan diameter 8 mm sebagai tempat inokulasi


22

variasi konsentrasi minyak atsiri, kontrol pelarut (etanol 96%) dan kontrol positif (minyak kemangi 100%). Pembuatan lubang menembus layer atas, sedangkan layer bawah sebagai alas supaya sampel tidak menyebar ke dasar cawan petri. Minyak atsiri dengan berbagai variasi konsentrasi diinokulasikan sebanyal 50 l dan diinkubasi selama 24 jam dengan suhu 37C. Saat akan diinkubasi sebelumnya cawan petri dibungkus menggunakan plastic wrab. Daya antibakteri yang diamati berdasarkan zona hambat yang terbentuk dibandingkan kontrol pelarut etanol 96% dikurangi dengan diameter sumuran yang digunakan (8mm). Dilakukan replikasi 3 kali.

8. Penentuan nilai KHM dan KBM dengan dilusi padat Uji ini menggunakan tiga macam kontrol, yaitu kontrol sterilitas media, kontrol pertumbuhan bakteri, dan kontrol negatif (kontrol pelarut). Kontrol pelarut ini berfungsi untuk melihat apakah pelarut yang digunakan untuk melarutkan minyak atsiri, yaitu etanol 96% memiliki aktivitas menghambat pertumbuhan bakteri uji atau tidak. Pembuatannya dengan cara menambahkan bakteri uji dan etanol 96% ke dalam media MHA, kemudian dilakukan pour plate ke dalam cawan petri steril. a. Uji daya antibakteri dengan dilusi padat Untuk pengujian antibakteri dengan dilusi padat, variasi konsentrasi minyak kemangi didapatkan berdasarkan daya hambat yang diperoleh pada difusi sumuran. Konsentrasi terkecil yang mempunyai aktivitas menghambat pertumbuhan bakteri pada uji dengan difusi sumuran,


23

konsentrasinya diturunkan dan dinaikkan untuk nantinya dapat diketahui nilai KHM dan KBM dari minyak atsiri daun kemangi. Pembuatan suspensi dilakukan untuk kedua bakteri uji yang kekeruhannya sudah dibandingkan dengan standar Mc Farland 0,5 dan diinkubasi selama 24 jam. Variasi konsentrasi minyak kemangi yang telah ditentukan sebanyak 1 ml bersama dengan suspensi bakteri sebanyak 1 ml dimasukkan ke dalam cawan petri steril secara pour plate. Diinkubasikan selama 24 jam dengan suhu 37oC. Pertumbuhan bakteri dilihat dari kekeruhan media, semakin banyak pertumbuhan bakteri maka media akan semakin keruh, begitu pula sebaliknya. Pembacaan hasil daya antibakteri diberi penilaian dengan notasi (+++) untuk pertumbuhan bakteri yang sangat keruh, (++) keruh, (+) agak keruh, dan (-) jernih. Kekeruhan media perlakuan dibandingkan dengan kontrol sterilitas dan kontrol pertumbuhan.

b. Penentuan nilai KHM dan KBM Penentuan nilai KHM dan KBM dengan melakukan streak plate dari hasil uji daya antibakteri secara dilusi padat. Media dari hasil uji dilusi padat berbagai variasi konsentrasi yang memberikan kejernihan media secara visual, diambil 1 ose dan dilakukan streak plate pada media MHA steril. Nilai KHM ditentukan dari konsentrasi terkecil yang menunjukkan media jernih kemudian dilakukan streak plate dan masih terjadi pertumbuhan bakteri. Nilai KBM ditentukan dari konsentrasi terkecil yang


24

menunjukkan media jernih kemudian dilakukan streak plate dan tidak terjadi pertumbuhan bakteri di tempat dilakukan streak plate.

9. Pembuatan gel anti bau kaki minyak atsiri daun kemangi Formula gel dalam 100 g (Yuliani, 2005). R/

Etanol 96%

26,7 g

Propilenglikol

12,4 g

Larutan carbopol 3% b/v

34,0 g

Aquadest

17,2 g

Trietanolamin

1,4 g

Minyak atsiri

10,0 g

Komposisi minyak atsiri daun kemangi yang dimasukkan dalam formula didapatkan dari nilai diameter zona hambat yang memberikan nilai paling besar. Hal ini dilakukan agar daya hambat yang diberikan gel minyak kemangi adalah yang paling baik. Dari formula tersebut di atas dilakukan modifikasi sebagai berikut: Tabel I. Formula sediaan gel anti bau kaki minyak kemangi Gel Minyak Kemangi (gram)

Kontrol Basis Gel Minyak Kemangi (gram)

Etanol 96%

24,8

29,1

Propilenglikol

11,5

13,5

Larutan carbopol 3% b/v

31,5

37,1

Aquadest

15,9

18,8

Trietanolamin

1,3

1,5

Minyak atsiri

15

-

Material


25

Larutan carbopol 3% b/v dibuat dengan cara mengembangkan carbopol dalam aquadest yang sesuai dalam formula selama 24 jam. Selanjutnya dicampurkan dengan propilenglikol, aquadest, etanol, minyak atsiri daun kemangi, dan trietanolamin dengan mixer sampai terbentuk sediaan gel.

10. Uji sifat fisik sediaan gel anti bau kaki minyak atsiri daun kemangi Pengukuran sifat fisik gel anti bau kaki minyak kemangi dilakukan 48 jam setelah pembuatan, yang meliputi: a. Uji viskositas Pengukuran viskositas dilakukan dengan menggunakan Viscotester Rion seri VT 04. Sebanyak 100 gram sediaan dimasukkan ke dalam wadah dan dipasang pada portable viscotester. Viskositas diamati pada skala yang ditunjukkan jarum penunjuk setelah tercapai kestabilan. b. Uji daya sebar Pada satu sisi double plate berskala diletakkan 0,5 g gel dan kemudian disatukan, didiamkan selama 1 menit, diberi beban 50 g didiamkan 1 menit, diberi tambahan beban 50 g dan didiamkan 1 menit, kemudian diberi tambahan 50 g, sehingga bobot beban total 150 g, dan didiamkan 1 menit kemudian diukur diameter penyebarannya dengan melihat dari beberapa sisi.


26

11. Uji daya antibakteri sediaan gel anti bau kaki minyak atsiri daun kemangi terhadap Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis dengan metode difusi sumuran Dibuat 6 lubang sumuran dengan diameter 8 mm pada cawan petri yang telah berisi MHA double layer. Masing-masing sumuran diisi 100 mg gel minyak kemangi, 100 mg kontrol basis gel, 50 µl (minyak kemangi 15%), 100 mg kontrol positif (Clindamycin phosphate gel), 50 µl kontrol negatif (etanol 96%), kemudian diinkubasi selama 24 jam pada suhu 37ºC. Sebelum diinkubasi, cawan petri dibungkus menggunakan plastic wrab.

F.

Analisis Data

Data yang diperoleh dari penelitian ini akan dianalisis menggunakan program sofware R 2.14.1. Data yang akan dianalisis secara statistik meliputi data diameter zona hambat minyak kemangi dan gel anti bau kaki minyak kemangi terhadap Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis, serta data pengukuran viskositas dan daya sebar gel anti bau kaki minyak kemangi. Analisis statistik diawali dengan melihat kenormalan data yang diperoleh menggunakan uji Shapiro Wilk. Bila data yang didapat terdistribusi normal maka dilanjutkan dengan uji parametrik menggunakan Levene test, sedangkan bila data terdistribusi tidak normal digunakan uji non parametrik yaitu Kruskal-Wallis. Analisis data yang telah diperoleh dilanjutkan dengan menggunakan uji Wilcoxon untuk mengetahui ada atau tidaknya perbedaan di antara data-data yang diperoleh.


BAB IV HASIL DAN PEMBAHASAN

A. Identifikasi Daun Kemangi Daun kemangi yang digunakan dalam penelitian ini diperoleh dari Pasar Tradisional Beringharjo, Yogyakarta dalam bentuk tanaman kemangi segar. Untuk mengetahui kebenaran tentang tanaman kemangi yang digunakan dilakukan determinasi tanaman berdasarkan Steenis (1975) (Lampiran 1).

Gambar 3. Daun kemangi

B. Penyiapan Bahan Daun Kemangi Penyiapan bahan daun kemangi dilakukan dengan memilih daun kemangi yang masih segar serta memisahkan daun kemangi dari batang dan bunga. Daun kemangi kemudian dicuci untuk menghilangkan pengotor yang kemungkinan terdapat di daun.

C. Destilasi Minyak Atsiri Daun Kemangi Pengambilan minyak atsiri dari daun kemangi dilakukan menggunakan destilasi metode uap dan air. Destilasi uap dan air digunakan karena daun kemangi rusak saat pendidihan langsung menggunakan air dan mudah menguap. 27


28

Minyak atsiri daun kemangi dan air yang telah menguap kemudian akan melewati pendingin dan akan tertampung di tempat penampung, yaitu tabung berskala. Tempat penampung minyak atsiri daun kemangi ditutup dengan alumunium foil karena minyak atsiri bersifat fotosensitif. Pada penampung akan terbentuk 2 fase, yaitu minyak atsiri daun kemangi di bagian atas dan air di bagian bawah karena bobot jenis air lebih tinggi daripada minyak atsiri. Minyak atsiri daun kemangi dipisahkan dari fase air, kemudian diberi natrium sulfat anhidrat untuk menarik air yang kemungkinan masih tertinggal di dalam minyak atsiri, sehingga minyak atsiri yang didapat adalah murni minyak atsiri daun kemangi. Minyak atsiri daun kemangi yang didapatkan dari hasil destilasi berwarna kuning muda kemerahan dan berbau aromatis kemangi.

Gambar 3. Minyak Atsiri Daun Kemangi Rendemen minyak atsiri daun kemangi yang dihasilkan berdasarkan tiga kali replikasi adalah 0,23 ± 0,038 %v/b (Lampiran 4). Rendemen minyak atsiri daun kemangi adalah berada di rentang 0,18% - 0,32% (Kardinan, 2005), dari hasil penelitian jumlah rendemen yang didapatkan sudah masuk ke dalam rentang rendemen.


29

D. Karakterisasi Minyak Atsiri Daun Kemangi Penelitian ini bertujuan untuk mengetahui karakteristik minyak atsiri daun kemangi dengan menggunakan pemeriksaan organoleptis, bobot jenis, indeks bias, dan KLT. 1. Pemeriksaan organoleptis minyak atsiri daun kemangi Pemeriksaan ini dilakukan dengan melihat bau, warna dan kejernihan. Pada penelitian Hadipoentyanti dan Sri (2008), minyak atsiri daun kemangi memiliki warna kuning, seperti warna minyak atsiri yang dihasilkan pada penelitian ini. Aroma dari minyak atsiri daun kemangi adalah berbau khas aromatik seperti aroma dari daunnya. Minyak atsiri yang dihasilkan tampak jernih. 2. Pemeriksaan bobot jenis minyak atsiri daun kemangi Dari hasil penelitian didapatkan bobot jenis minyak atsiri daun kemangi adalah 0,8877 ± 0,00174 g/mL (Lampiran 5). Menurut Anon (cit., Hadipoentyanti dan Sri, 2008), berdasarkan EOA (Essential Oil Association of USA) bobot jenis minyak atsiri daun kemangi yaitu sekitar 0,952 - 0,973 g/mL. Hal ini dapat dimungkinkan karena adanya perbedaan tempat tumbuh tanaman kemangi yang digunakan dan perbedaan kemurnian dari minyak atsiri yang dihasilkan. 3. Nilai indeks bias minyak atsiri daun kemangi Pemeriksaan ini bertujuan untuk mengetahui nilai indeks bias minyak atsiri daun kemangi, dengan prinsip penggunaan alat adalah bahwa sampel diletakkan di antara prisma kaca dan tempat absorbsi sinar. Sinar yang


30

masuk mempunyai sudut pembelokkan yang lebih pendek dibandingkan dengan sudut kritis yang melewati cairan sampel yang kemudian akan diabsorbsi. Hal ini akan menimbulkan perbedaan warna gelap dan terang yang dapat dibaca menggunakan skala yang tertera pada alat (Varcoe, 2001). Berdasarkan hasil penelitian didapatkan nilai indeks bias minyak atsiri daun kemangi adalah 1,4819 ± 0,001 (Lampiran 5). Nilai ini mendekati nilai indeks bias hasil penelitian Hadipoentyanti dan Sri (2008), yaitu sekitar 1,5176. 4. Profil kromatografi lapis tipis minyak atsiri daun kemangi Pemeriksaan ini bertujuan untuk membuktikan adanya kandungan eugenol dalam minyak atsiri daun kemangi yang diduga menjadi salah satu senyawa aktif yang dapat menghambat bakteri penyebab bau di kaki. Menurut Chairul (2005), fase gerak yang dapat digunakan adalah n-heksana - etilasetat dengan perbandingan 10 : 1 (v/v). Fase diam yang digunakan adalah silika gel GF254. Penampak bercak yang digunakan adalah vanilin asam sulfat dan standar yang digunakan adalah eugenol. Sampel yang akan digunakan terlebih dahulu dilakukan pengenceran dengan perbandingan 1:20 yang berfungsi agar konsentrasi minyak atsiri tidak terlalu pekat yang dapat mengakibatkan terjadinya tailing. Plat yang telah ditotolkan standar dan sampel dimasukkan ke dalam chamber berisi fase gerak yang telah dijenuhkan terlebih dahulu. Jarak pengembangan yang digunakan adalah 10 cm. Setelah itu, dilakukan pengeringan dan penyemprotan bercak menggunakan vanilin asam sulfat dan


31

dilakukan pemanasan 100ºC. Didapatkan bercak dengan warna ungu (Gambar 4). Namun, pada gambar, warna ungu pada standar eugenol tidak dapat jelas terlihat. Dari hasil penelitian didapatkan nilai Rf standar eugenol, yaitu 0,5. Nilai Rf sampel minyak atsiri daun kemangi dari dua kali replikasi berturutturut adalah 0,44 dan 0,45. Nilai Rf standar eugenol dan sampel minyak atsiri daun kemangi mempunyai nilai Rf yang hampir sama dan warna yang mirip, sehingga dapat dikatakan bahwa minyak atsiri daun kemangi hasil destilasi kemungkinan besar memiliki kandungan eugenol.

Rf: 0,5 Rf: 0,44

Rf: 0,45

1 a.

2

3

Profil KLT di 254 nm

1

2

3

b. Profil KLT setelah disemprot vanilin asam sulfat

Keterangan: (1) Penotolan standar eugenol; (2) penotolan sampel minyak atsiri daun kemangi replikasi I; (3) penotolan sampel minyak atsiri daun kemangi replikasi II.

Gambar 4. Profil Kromatografi Lapis Tipis


32

E. Uji Daya Antibakteri Minyak Atsiri Daun Kemangi terhadap Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis Salah satu penyebab bau pada kaki yaitu bakeri Staphylococcus epidermidis yang merupakan flora normal di kulit dan Bacillus subtilis. Minyak kemangi dapat menghambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis (Khare, 2004). Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis dapat mengubah asam amino leusin di keringat menjadi asam isovalerat dengan bantuan enzim leucine dehydrogenase yang mampu menimbulkan bau tidak enak di kaki. Untuk mengetahui daya antibakteri minyak kemangi digunakan metode difusi sumuran dengan membuat lubang sumuran pada media padat menggunakan pelubang nomor 4 (8mm). Kontrol yang digunakan pada metode ini adalah kontrol sterilitas media, kontrol pertumbuhan bakteri uji (Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis), kontrol negatif (etanol 96%) dan minyak atsiri 100% (kontrol positif). Kontrol sterilitas media berfungsi untuk pengamatan keaseptisan langkah penelitian dan mengetahui tingkat sterilitas media yang digunakan. Kontrol sterilitas media dibuat dengan menuang media MHA steril pada cawan petri dengan metode double layer dan dibuat sumuran. Hasil pengamatan, tidak ditemukan adanya pertumbuhan bakteri atau kontaminan pada media, sehingga dapat disimpulkan bahwa media dalam keadaan steril dan pengerjaan juga steril. Kontrol pertumbuhan bakteri digunakan untuk mengetahui pertumbuhan normal bakteri uji pada media yang dituang secara steril dengan pour plate. Hasil penelitian menunjukkan bakteri dapat tumbuh dengan baik.


33

Kontrol negatif berfungsi untuk melihat pelarut minyak atsiri yaitu etanol 96% mempunyai kemampuan menghambat pertumbuhan bakteri atau tidak. Pelarut yang digunakan adalah etanol 96% karena minyak kemangi dapat larut sempurna. Kontrol positif berfungsi sebagai pembanding untuk melihat aktivitasnya sama atau tidak dengan berbagai variasi konsentrasi yang lain. Kontrol positif sebagai pembanding karena minyak atsiri dengan konsentrasi 100% tidak dimungkinkan menjadi dosis terapi karena dikhawatirkan dapat mengiritasi kulit di tempat pengaplikasian. Daya antibakteri ditunjukkan dengan diameter zona hambat jernih yang sudah dikurangi dengan diameter sumuran. Zona hambat berupa zona jernih di sekitar sumuran yang menandakan tidak adanya pertumbuhan bakteri. Hasil pengukuran rerata diameter zona hambat minyak atsiri daun kemangi terhadap bakteri Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis secara berturut-turut (Lampiran 6 dan 7) adalah sebagai berikut. Tabel II. Hasil uji 𝝌 ± SD diameter zona hambat minyak atsiri daun kemangi terhadap Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis

Konsentrasi minyak atsiri daun kemangi (%) 2,5 5 10 15 20 50 100 Kontrol pelarut (etanol 96%)

Diameter zona hambat (mm) Staphylococcus epidermidis

Bacillus subtilis

4,0 ± 0,0 7,7 ± 0,6 11,7 ± 0,6 13,7 ± 1,2 12,0 ± 3,0 11,7 ± 0,6 10,3 ± 1,2 0

9,0 ± 1,0 9,7 ± 1,6 10,0 ± 1,0 12,3 ± 1,0 11,7 ± 1,5 12,0 ± 0,0 10,3 ± 0,6 0


34

Konsentrasi vs diameter zona hambat 16 14 12 10 8 6 4 2 0

Staphylococcus epidermidis Bacillus subtilis

Gambar 5. Grafik konsentrasi vs diameter zona hambat minyak atsiri daun kemangi terhadap Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis Menurut Junior and Zanil (cit., Gupta, Amar, Ramesh, Archana, 2008), tingkatan keaktifan suatu antibakteri dilihat dari diameter zona hambatnya adalah golongan inaktif (diameter zona hambat < 9 mm); cukup aktif (diameter zona hambat 9-12 mm); aktif (diameter zona hambat 13-18 mm); dan sangat aktif (diameter zona hambat >18 mm). Hasil penelitian mengenai diameter zona hambat minyak atsiri daun kemangi terhadap Staphylococcus epidermidis, didapatkan kenaikan berkala dari variasi konsentrasi terendah (2,5%) sampai pada konsentrasi 15%, kemudian mengalami penurunan kembali pada konsentrasi 20% - 100%. Konsentrasi minyak kemangi 10%, 15% dan 20% adalah konsentrasi yang dijadikan pertimbangan untuk dapat dimasukkan ke dalam formula gel. Diameter zona hambat minyak atsiri daun kemangi antara konsentrasi 10% dan 15%; dan konsentrasi 15% dan 20% tidak mengalami perbedaan bermakna (Tabel IV). Hal


35

ini menandakan bahwa daya antibakteri minyak atsiri daun kemangi antara tiga konsentrasi tersebut hampir sama. Begitu pula dengan diameter zona hambat minyak atsiri daun kemangi terhadap Bacillus subtilis, terjadi kenaikan diameter zona hambat dari konsentrasi 2,5% sampai 15%, mengalami penurunan pada konsentrasi 20% dan mengalami kenaikan kembali pada konsentrasi 50%. Kenaikan yang dialami hampir sama dengan diameter konsentrasi 15% yang mempunyai diameter paling besar. Berdasarkan perhitungan statistik (Tabel V), diameter zona hambat pada konsentrasi 10% dan 15% mengalami perdedaan bermakna, konsentrasi 15 % dan 20% tidak mengalami perbedaan bermakna, begitu pula dengan konsentrasi 15% dan 50% tidak mengalami perbedaan bermakna. Perbedaan tidak bermakna ini dapat dikarenakan nilai diameter zona hambat yang dihasilkan tidak terlalu jauh berbeda (Lampiran 6 dan 7). Konsentrasi 2,5% tidak mengalami perbedaan bermakna dengan konsentrasi 10%, 20%, dan 100%, dan tampak bahwa konsentrasi 20% juga mengalami perbedaan tidak bermakna dengan konsentrasi yang lain kecuali dengan kontrol negatif (Tabel V). Pengaruh afinitas minyak atsiri daun kemangi dalam sediaan dapat mempengaruhi pelepasan minyak dari sediaan, sehingga konsentrasi yang akan diformulasikan ke bentuk sediaan adalah konsentrasi 15%. Hal ini dikarenakan konsentrasi 15% memiliki nilai zona hambat yang paling besar, baik terhadap bakteri Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis, serta tingkat keaktifan daya antibakterinya termasuk golongan cukup aktif sampai aktif, sehingga diharapkan saat dibuat dalam bentuk sediaan memiliki daya hambat yang


36

maksmial. Minyak atsiri daun kemangi dengan konsentrasi yang kecil, yaitu 2,5% mampu memberikan aktivitas daya hambat terhadap bakteri Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis dengan rata-rata diameter secara berturut-turut adalah 4 mm dan 9 mm. Kontrol negatif yaitu kontrol pelarut etanol 96% tidak ditemukan adanya zona hambat di sekitar sumuran, ini menandakan bahwa pelarut minyak atsiri daun kemangi tidak memiliki daya hambat terhadap bakteri Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis, sehingga tidak mempengaruhi hasil daya hambat minyak kemangi. Tabel III. Hasil uji distribusi normal data diameter zona daya hambat variasi konsentrasi minyak atsiri daun kemangi terhadap Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis Variasi Konsentrasi

Staphylococcus epidermidis

Bacillus subtilis

2,5%

-

N

5%

TN

N

10%

TN

N

15%

TN

TN

20%

N

N

50%

TN

-

100%

TN

TN

Kontrol (-)

-

-

Keterangan: N: Data normal;

TN: Data tidak normal

(-): Not available

Berdasarkan tabel di atas, terlihat bahwa terdapat distribusi data yang tidak normal. Pengukuran analisis statistik kemudian dilakukan dengan menggunakan uji Kruskal-Wallis untuk melihat terdapat perbedaan antar kelompok konsentrasi, dan didapatkan nilai p-value < 0,05. Hal ini menandakan bahwa antara kelompok konsentrasi terdapat kelompok yang berbeda. Untuk mengetahui kelompok yang


37

mengalami perbedaan analisis dilanjutkan dengan test post hoc menggunakan uji Wilcoxon. Tabel IV. Hasil post hoc test diameter zona daya hambat variasi konsentrasi minyak atsiri daun kemangi terhadap Staphylococcus epidermidis Konsentrasi (%)

2,5

5

10

15

20

50

100

K-

2,5

-

BB

BB

BB

BB

BB

BB

BB

5

BB

-

BB

BB

BB

BB

BB

BB

10

BB

BB

-

BB

BTB

BTB

BTB

BB

15

BB

BB

BB

-

BTB

BB

BB

BB

20

BB

BB

BTB

BTB

-

BTB

BTB

BB

50

BB

BB

BTB

BB

BTB

-

BTB

BB

100

BB

BB

BTB

BB

BTB

BTB

-

BB

K-

BB

BB

BB

BB

BB

BB

BB

-

Keterangan: BTB (Berbeda Tidak Bermakna); BB (Berbeda Bermakna); K- (Kontrol negatif: etanol 96%).

Tabel V. Hasil post hoc test diameter zona daya hambat variasi konsentrasi minyak atsiri daun kemangi terhadap Bacillus subtilis Konsentrasi (%)

2,5

5

10

15

20

50

100

K-

2,5

-

BTB

BTB

BB

BTB

BB

BB

BB

5

BTB

-

BTB

BB

BTB

BB

BTB

BB

10

BTB

BTB

-

BB

BTB

BB

BTB

BB

15

BB

BB

BB

-

BTB

BTB

BB

BB

20

BTB

BTB

BTB

BTB

-

BTB

BTB

BB

50

BB

BB

BB

BTB

BTB

-

BB

BB

100

BB

BTB

BTB

BB

BTB

BB

-

BB

K-

BB

BB

BB

BB

BB

BB

BB

-

Keterangan: BTB (Berbeda Tidak Bermakna); BB (Berbeda Bermakna); K- (Kontrol negatif: etanol 96%).


38

F. Penentuan nilai KHM dan KBM Minyak Atsiri Daun Kemangi Berdasarkan hasil zona hambat yang sudah diperoleh dari uji difusi sumuran, dilakukan penelitian lebih lanjut untuk mengetahui nilai KHM dan KBM dari minyak kemangi. Langkah awal untuk melakukan uji KHM dan KBM adalah dengan menentukan variasi konsentrasi minyak atsiri daun kemangi yang akan digunakan. Hal ini dilihat dari konsentrasi terkecil pada uji difusi sumuran yang menunjukkan aktivitas penghambatan terhadap Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis. Berdasarkan hasil uji difusi sumuran, konsentrasi terkecil yang menunjukkan aktivitas penghambatan adalah 2,5%, baik dalam menghambat Staphylococcus epidermidis maupun Bacillus subtilis. Oleh karena itu, variasi konsentrasi yang digunakan adalah 1%; 1,5%; 2%; 2,5%; 3%; 3,5% dan 4%. Pengamatan yang dilakukan adalah dengan melihat tingkat kekeruhan media yang telah diberi bakteri uji dan variasi konsentrasi.

Tabel VI. Hasil uji KHM dan KBM minyak atsiri daun kemangi terhadap Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis

Konsentrasi

Kekeruhan Staphylococcus epidermidis Replikasi I Replikasi Replikasi II III ++ + ++ + + +++ +++ +++

1% 1,5% 2% 2,5% 3% 3,5% 4% Kontrol negatif (etanol 96%) Keterangan: +++: sangat keruh

++: keruh

Kekeruhan Bacillus subtilis Replikasi I + + +++

+: agak keruh

Replikasi II + + +++

Replikasi III + + +++

: jernih


39

Dari hasil pengamatan (Tabel VI), pada bakteri Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis tampak memiliki hasil yang sama, yaitu pada konsentrasi 1% dan 1,5% tampak kekeruhan media yang menandakan masih adanya pertumbuhan bakteri. Sedangkan pada konsentrasi 2% - 4% media menunjukkan kejernihan. Kemudian untuk menentukan nilai KHM dan KBM, dari media yang mempunyai kejernihan dilakukan streak plate pada media yang steril. Apabila hasil inkubasi dari streak plate pada konsentrasi 2%; 2,5%; 3%; 3,5% dan 4% tersebut pada konsentrasi terkecil menunjukkan masih terdapat pertumbuhan bakteri, maka konsentrasi tersebut ditentukan sebagai konsentrasi KHM. Sedangkan bila hasil inkubasi menunjukkan tidak terdapat lagi pertumbuhan bakteri, maka konsentrasi tersebut adalah konsentrasi KBM. Dari hasil penelitian, nilai KHM dan KBM minyak atsiri daun kemangi terhadap bakteri Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis menunjukkan kesamaan, yaitu dengan nilai KHM adalah 2% v/v dan nilai KBM adalah 2,5% v/v (Tabel VI). Hasil yang menunjukkan kesamaan ini dikarenakan karakteristik bakteri Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis yaitu sama-sama merupakan bakteri gram positif. Oleh karena itu, minyak atsiri daun kemangi ini mampu menghambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis yang memegang peranan utama menyebabkan bau di kaki. Kontrol pelarut (etanol 96%) menunjukkan media tampak keruh, yang menandakan bahwa terjadi pertumbuhan bakteri. Hal ini menandakan bahwa pelarut

etanol tidak

memberikan

aktivitas

dalam

menghambat

bakteri


40

Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis, sama seperti pada uji difusi sumuran. Bakteri Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis adalah bakteri gram positif yang mempunyai dinding sel lebih tebal dibandingkan dengan bakteri gram negatif. Tekanan osmotik yang tinggi dari lingkungan bakteri dapat menyebabkan pecahnya sel apabila dinding sel tidak kuat menahannya. Dinding sel bakteri gram positif yang 90% terdiri dari peptidoglikan cukup kuat untuk menahan tekanan osmotik tersebut (Maryati, Ratna, dan Triastuti, 2007). Mekanisme antibakteri dari komponen minyak kemangi belum diketahui secara pasti. Namun, eugenol yang menjadi senyawa antibakteri yang merupakan turunan dari golongan senyawa fenol mempunyai efek dalam merusak membran sel. Ikatan antara fenol dengan dinding sel bakteri akan mengganggu permeabilitas membran sel dan proses transportasi, sehingga sel bakteri akan kehilangan kation dan makromolekul sehingga mengakibatkan pertumbuhan sel terganggu dan mengalami kematian. Senyawa fenol dengan konsentrasi yang rendah akan menyebabkan denaturasi protein sel bakteri, sehingga protein akan menjadi keras dan beku, pori-pori mengecil sehingga hanya sedikit senyawa eugenol yang mampu menembus dinding sel, sedangkan dalam konsentrasi tinggi akan menyebabkan koagulasi protein sehingga sel bakteri mengalami kematian (Siswandono, cit., Maryati, Ratna, dan Triastuti, 2007).


41

G. Formulasi Sediaan Gel Anti Bau Kaki Minyak Atsiri Daun Kemangi Dasar pemilihan pembuatan sediaan gel adalah karena sediaan gel untuk pemakaian di kaki masih sangat jarang. Selain itu, gel dapat memberikan sensasi dingin sehingga dapat memberikan kenyamanan kepada pasien saat diaplikasikan di kulit kaki. Sediaan gel mempunyai aliran tiksotropik dan pseudoplastik, yaitu gel akan berbentuk padat saat penyimpanan dan akan segera mencair bila diberikan shear stress yaitu pengocokan. Untuk membentuk suatu massa gel yang baik dibutuhkan bahan pembentuk gel yang tidak terlalu banyak, dan tidak mengalami perubahan viskositas yang drastis saat penyimpanan, sehingga mudah dioleskan dan dicuci (Boesro, dkk, 2007 dan Christina, dkk, 2007). Penggunaan sediaan topikal untuk aplikasi yang meluas pada orang dewasa adalah maksimum terdiri dari 25% minyak atsiri di sediaan, namun bila minyak mengandung fenol atau aldehid yang kaya akan minyak, konsentrasi tidak boleh melebihi 20%. Konsentrasi dosis tinggi hanya dapat digunakan pada jangka pendek tidak pada jangka panjang, karena akan menimbulkan resistensi dari bakteri, sehingga yang dapat digunakan adalah konsentrasi dengan dosis rendah pada penggunaan jangka panjang (Bensouilah and Philippa, 2006). Konsentrasi minyak kemangi yang dimasukkan dalam sediaan adalah 15% terhadap jumlah total sediaan. Dalam formula sediaan gel dipilih konsentrasi minyak kemangi 15% karena berdasarkan hasil uji difusi sumuran konsentrasi minyak atsiri daun kemangi 15% memiliki zona hambat yang paling besar terhadap bakteri Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis. Selain itu, berdasarkan karakteristik tingkat keaktifan suatu diameter bakteri dan jumlah maksimal


42

konsentrasi minyak atsiri yang dapat diformulasikan ke dalam sediaan, maka dipilihlah konsentrasi 15% yang akan dimasukkan ke dalam formulasi gel anti bau pada kaki. Berdasarkan diameter zona hambat minyak atsiri daun kemangi 15% termasuk ke dalam golongan yang cukup aktif sampai aktif, dan gel anti bau pada kaki ini bukan untuk membunuh bakteri penyebab bau, tetapi hanya untuk menghambat pertumbuhan bakteri, mengingat kedua bakteri ini merupakan flora normal di kulit. Gelling agent yang digunakan adalah Carbopol 940® untuk membatasi pergerakan minyak daun kemangi sehingga pelepasan obat dapat secara perlahanlahan. Carbomer saat didispersikan ke dalam air akan membentuk larutan asam yang keruh dan dapat dinetralkan dengan basa kuat, contohnya trietanolamin atau anorganik

lemah,

contohnya

ammonium

hidroksida.

Kemudian

akan

meningkatkan konsistensi dan mengurangi kekeruhan (Barry, cit., Yuliani, 2005). Netralisasi berlebihan pada Carbopol® menyebabkan turunnya viskositas dari karbomer (Voigt, 1995). Propilenglikol merupakan suatu humektan yang berfungsi untuk mempertahankan kandungan air di sediaan sehingga selama penyimpanan sediaan dapat stabil dan tidak terjadi perubahan sifat fisik (Allen, 2002). Makin banyak propilenglikol dalam suatu formula gel maka sediaan gel viskositasnya tinggi (Yuliani, 2005). Trietanolamin berfungsi sebagai penetral Carbopol 940 ® yang bersifat asam dengan mengionisasi gugus karboksil dari Carbopol® ketika terpapar cahaya dan terjadi oksidasi yang mengakibatkan terjadinya penurunan viskositas dispersi


Carbopol®.

Trietanolamin

juga

berfungsi sebagai

43

bahan penstabil dan

pengembang Carbopol® serta mencegah rusaknya dispersi Carbopol® yang menyebabkan gel menjadi keruh karena terpapar cahaya (Hasyim, Faradiba, dan Gina, 2011). Minyak kemangi yang terjebak di dalam matriks tidak mengalami pergerakan di dalam matriks. Pelepasan minyak ke luar dari sediaan adalah dengan berdifusi keluar seperti polimer yang mengembang. Pelepasan minyak ini bergantung pada dua proses simultan, yaitu perpindahan air ke matriks atau obat yang berdifusi keluar dari gel karena adanya pengembangan dari gel. Gel yang mengembang terus-menerus akan meningkatkan berdifusinya minyak keluar mencapai tempat terapi (Ratner, 2004), sehingga gel yang viskositasnya semakin tinggi, susunan matriksnya juga akan semakin rigid sehingga pelepasan obat dapat perlahan-lahan dan lama tinggal di tempat aplikasi. Gel minyak kemangi ini agak berminyak, berbeda dengan gel pada umumnya. Berikut ini adalah hasil formulasi sediaan gel anti bau pada kaki (Lampiran 9):

Gambar 6. Sediaan gel anti bau kaki minyak atsiri daun kemangi


44

Penetapan pH sediaan gel penting dilakukan untuk menghindari terjadinya iritasi di kulit saat pengaplikasian. pH yang diharapkan adalah berada pada range 4,5 – 6,5 yang merupakan pH normal kulit. Pengukuran pH dilakukan dengan menggunakan pH stick, dengan mencocokkan pada warna indikator pH. Berdasarkan hasil pengukuran pH (Lampiran 11), diketahui bahwa rerata pH gel anti bau kaki, yaitu 6 dan berada pada rentang pH kulit sehingga dapat meminimalkan iritasi pada kulit.

H. Uji Sifat Fisik Sediaan Gel Anti Bau Kaki Sifat fisik yang diuji pada penelitian ini meliputi uji viskositas dan daya sebar. Pengukuran sifat fisik viskositas dan daya sebar sediaan gel dilakukan pada 48 jam setelah pembuatan. Dipilih waktu 48 jam karena diharapkan gel sudah dapat membentuk sistem dengan sempurna tanpa adanya pengaruh energi geser akibat pencampuran. Viskositas adalah suatu sifat cairan yang berhubungan dengan hambatan untuk mengalir, semakin besar viskositas maka semakin besar pula hambatan untuk mengalir. Viskositas mempengaruhi pelepasan zat aktif dalam sediaan. Viskositas yang terlalu tinggi akan menghambat minyak untuk terlepas ke tempat aksi, sedangkan bila viskositas terlalu rendah akan susah saat pengaplikasian dan obat tidak akan bertahan lama di kulit. Oleh karena itu, diperlukan viskositas yang sesuai sehingga minyak dapat bergerak dan berdifusi ke luar sistem matriks menuju tempat aksi, namun dapat tinggal lama di kulit sehingga pelepasan obat dapat secara berkala dan terpenetrasi dengan baik. Viskositas dapat dipengaruhi


45

oleh Carbopol® dan propilenglikol dengan pengaruh berbanding lurus. Viskositas yang dapat digunakan berada di range 240-300 d.Pa.s. Pengukuran daya sebar berpengaruh pada pengaplikasian gel di kulit. Daya sebar dan viskositas berpengaruh pada penetrasi zat aktif ke kulit. Pengukuran daya sebar diambil berdasarkan diameter terbesar pada double plate. Daya sebar yang diharapkan adalah 3-6 cm. Hasil pengukuran uji sifat fisik gel anti bau pada kaki adalah sebagai berikut. Tabel VII. Data hasil pengukuran viskositas dan daya sebar Nilai parameter

Parameter Fisik

𝜒 ± SD

Sediaan Gel

Replikasi I Replikasi II Replikasi III

Viskositas (d.Pa.S)

250

245

250

248,330 ± 2,887

Daya sebar (cm)

5,2

4,8

4,3

4,767 ± 0,451

Dari hasil analisis statistik, data viskositas tidak terdistribusi normal dengan nilai p-value <0,05; sedangkan hasil analisis statistik untuk uji daya sebar data terdistribusi secara normal, nilai p-value >0,05.

I. Uji Daya Antibakteri Sediaan Gel Anti Bau Kaki Minyak Atsiri Daun Kemangi terhadap Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis Pengujian daya antibakteri gel anti bau kaki ini bertujuan untuk mengetahui apakah minyak atsiri daun kemangi yang diformulasikan ke dalam sediaan mampu menghambat pertumbuhan bakteri Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis penyebab bau pada kaki, sehingga dapat menjadi alternatif pembuatan sediaan obat yang baru.


46

Pengujian daya antibakteri menggunakan metode difusi sumuran karena merupakan sediaan semisolid dan tidak memungkinkan menggunakan paper disc karena tidak akan bercampur. Suatu sediaan dikatakan mempunyai potensi daya antibakteri apabila mempunyai kemampuan untuk menghambat pertumbuhan suatu bakteri dibandingkan dengan kontrol negatifnya. Pada penelitian ini sediaan gel anti bau kaki mempunyai daya antibakteri dibandingkan dengan kontrol negatif (etanol 96%) dan juga kontrol basis. Kontrol minyak 15% sebagai perbandingan apakah terjadi perbedaan diameter zona hambat antara minyak atsiri daun kemangi dibuat dalam bentuk sediaan atau tidak. Kontrol positif yang digunakan adalah Medi-Klin® (Clindamycin phosphate) dalam bentuk gel. Dilakukan inkubasi selama 24 jam karena pada 24 jam adalah waktu log phase dimana bakteri dalam siklus pertumbuhan, sehingga dapat dilihat aktivitas gel antibakteri dapat menghambat pertumbuhan sel bakteri atau tidak. Berikut ini adalah hasil pengamatan pengukuran rerata diameter zona hambat sediaan gel terhadap bakteri Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis (Lampiran 10 dan Tabel VII): Tabel VIII. Hasil 𝝌 ± SD pengukuran diameter zona hambat sediaan gel anti bau kaki terhadap Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis 𝝌 ± SD diameter zona hambat Bahan Bacillus subtilis Staphylococcus epidermidis Kontrol (-) etanol 96%

0

0

12,7 ± 0,6 mm

11,3 ± 1,2 mm

11,0 ± 2,0 mm

11,0 ± 2,0 mm

Kontrol basis gel

1,0 ± 1,7 mm

0

Kontrol (+) gel Clindamycin

27,7 ± 2,3 mm

17,3 ± 0,6 mm

Sediaan gel (dengan kandungan minyak atsiri 15%) Minyak atsiri 15%


47

Berdasarkan tabel di atas, dapat terlihat bahwa kontrol negatif dan kontrol basis gel tidak memberikan zona hambat terhadap pertumbuhan Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis. Hal ini menandakan bahwa etanol dan material formula gel tidak mempunyai daya antibakteri. Kontrol positif memberikan diameter yang lebih besar dari gel minyak kemangi, hal ini menandakan Clindamycin phosphate memberikan kemampuan yang lebih baik daripada minyak kemangi. Tabel IX. Hasil uji distribusi normal data diameter zona hambat gel minyak atsiri daun kemangi terhadap Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis Bahan

Staphylococcus epidermidis

Bacillus subtilis

-

-


TN

TN

TN

TN

Kontrol basis gel

TN

-

Kontrol (+)

TN

TN

Kontrol (-)

Keterangan: N: Data normal;

TN: Data tidak normal

(-): Not available

Tabel X. Hasil post hoc test diameter zona daya hambat gel minyak atsiri daun kemangi terhadap Staphylococcus epidermidis Kontrol

Sediaan

Minyak

Kontrol

Kontrol

(-)

gel

atsiri 15%

basis gel

(+)

-

BB

BB

BTB

BB


BB

-

BTB

BB

BB

BB

BTB

-

BB

BB

Kontrol basis gel

BTB

BB

BB

-

BB

Kontrol (+)

BB

BB

BB

BB

-

Bahan

Kontrol (-)

Keterangan: BB (Berbeda Bermakna)

BTB (Berbeda Tidak Bermakna)


48

Daya hambat gel minyak atsiri daun kemangi terhadap Staphylococcus epidermidis bila dibandingkan dengan minyak atsiri daun kemangi konsentrasi 15% tidak berbeda bermakna, dengan nilai p-value >0,05 (Tabel X). Begitu pula dengan daya hambat terhadap Bacillus subtilis, gel minyak atsiri daun kemangi dan minyak atsiri daun kemangi konsentrasi 15% tidak mengalami perbedaan bermakna dengan nilai p-value >0,05 (Tabel XI). Hal ini menandakan bahwa minyak atsiri daun kemangi yang diformulasikan dalam sediaan gel memiliki daya hambat yang sama dengan minyak atsiri yang tidak dibuat sediaan. Tabel XI. Hasil post hoc test diameter zona daya hambat gel minyak atsiri daun kemangi terhadap Bacillus subtilis Kontrol

Sediaan

Minyak

Kontrol

Kontrol

(-)

gel

atsiri 15%

basis gel

(+)

-

BB

BB

*

BB

BB

-

BTB

BB

BB

BB

BTB

-

BB

BB

*

BB

BB

-

BB

BB

BB

BB

BB

-

Bahan

Kontrol (-) Sediaan gel (dengan kandungan minyak atsiri 15%) Minyak atsiri 15% Kontrol basis gel Kontrol (+)

Keterangan: BB (Berbeda Bermakna)

BTB (Berbeda Tidak Bermakna)

* (Not available)

Berdasarkan hasil penelitian yang telah dilakukan, dapat dirangkum bahwa uji difusi sumuran minyak atsiri daun kemangi terhadap Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis didapatkan konsentrasi yang menghasilkan diameter zona hambat terbesar adalah 15%. Konsentrasi inilah yang akan digunakan dalam pembuatan sediaan gel anti bau kaki. Nilai KHM dan KBM yang didapatkan untuk Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis adalah


49

sama, yaitu 2% v/v dan 2,5% v/v. Sediaan gel anti bau kaki minyak atsiri daun kemangi memiliki perbedaan tidak bermakna dengan minyak kemangi 15%, karena nilai p-value >0,05. Hal ini menandakan bahwa aktivitas minyak atsiri daun kemangi dengan atau tanpa diformulasikan ke dalam sediaan memiliki khasiat penghambatan terhadap Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis yang sama. Keterbatasan dalam penelitian ini adalah minyak atsiri daun kemangi yang didapatkan belum murni dengan menggunakan natrium sulfat anhidrat, karena air belum sepenuhnya terpisah dari minyak atsiri. Memperoleh minyak atsiri dari daun kemangi ini membutuhkan waktu yang sangat lama dan biaya yang cukup besar, karena jumlah daun segar yang dibutuhkan sangat banyak. Pada pengujian daya antibakteri minyak kemangi secara difusi sumuran, kontrol positif yang digunakan adalah minyak kemangi konsentrasi 100%, seharusnya sebagai perbandingan digunakan contoh antibakteri yang sudah digunakan di pasaran. Kontrol positif yang digunakan dalam uji daya antibakteri gel minyak atsiri daun kemangi yang digunakan adalah antibiotik sintetis, sebaiknya menggunakan senyawa alam yang juga mempunyai daya antibakteri, seperti timol dan citral.


BAB V KESIMPULAN DAN SARAN A. Kesimpulan 1. Minyak atsiri daun kemangi dan gel anti bau kaki minyak atsiri daun kemangi mempunyai daya antibakteri terhadap Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis. 2. Nilai KHM dan KBM minyak atsiri daun kemangi terhadap bakteri Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis adalah sama, secara berturutturut, yaitu 2%v/v dan 2,5%v/v. 3. Efektivitas daya antibakteri minyak atsiri daun kemangi tidak berbeda dengan gel anti bau kaki minyak atsiri daun kemangi.

B. Saran 1. Perlu dilakukan optimasi formula untuk mendapatkan penampakan gel yang baik ditinjau dari stabilitas dan acceptability sediaan. 2. Perlu dilakukan uji iritasi sediaan gel dengan menggunakan uji iritasi, contohnya uji sesuai pedoman dari OECD (Organization for Economic Cooperation and Development).

50


51

DAFTAR PUSTAKA Agromedia, R., 2008, Buku Pintar Tanaman Obat: 431 Jenis Tanaman Obat Penggempur Aneka Penyakit, Cet. 1, Agromedia Pustaka, Jakarta, pp. 218219. Allen, L.V.Jr., 2002, The Art, Science, and Technology of Pharmaceutical Compounding, 2nd ed, American Pharmaceutical Association, Washington D.C., pp 301-305. Ara, K., Masakatsu H., Syunichi A., Kenzo K.,Koichi O., Toyoki H., et al., 2006, The Odor Due to Microbial Metabolism and its Control, Can. J. Microbiol,52, 357-364. Bensouilah J., and Philippa B., 2006, Aromadermatology Aromatherapy in the Treatment and Care of Common Skin Conditions, Radcliffe Publishing Ltd, Abingdon, pp. 125-128. Boesro S., Taofik R., dan Riza R., 2007, Formulasi Gel Antioksidan dari Ekstrak Umbi Wortel (Daucus carota L.) dengan Menggunakan Aquapec HV-505, Makalah Kongres Ilmiah, Universitas Padjajaran, Bandung. Departemen Kesehatan RI, 1985, Cara Pembuatan Simplisia, Departemen Kesehatan RI, Jakarta, pp.105-125. Desai, A., and Mary L., 2007, Gibaldi’s Drug Delivery Systems in Pharmaceutical Care, American Society of Health-System Pharmacists, Bethesda, pp. 48-49. Devine, K.M., 2000, Bacillus subtilis, Genetics, Encyclopedia of Microbiology, 1, 373. Dewi, P. D., 2008, Pemisahan Minyak Atsiri Daun Kemangi (Ocimum basilicum) Secara Kromatografi Lapis Tipis dan Aktivitasnya Terhadap Massezia furfur In Vitro, Fakultas Kedokteran Universitas Diponegoro, Semarang. Dzulkarnain B. dan Wahjoedi B., 1996, Informasi Ilmiah Kegunaan Kosmetika Tradisiolnal, Cermin Dunia Kedokteran, No. 108, pp. 21-26. Elsevier, 1997, New Cosmetic Science, Elsevier Science B.V., Amsterdam, p 466. Endarti, Yulinah E., dan Soediro I., 2002, Kajian Aktivitas Asam Usnat terhadap Bakteri Penyebab Bau Badan, http://file.upi.edu/Direktori/FPMIPA/JUR._ PEND._BIOLOGI/196611031991012-YANTI_HAMDIYATI/JURNAL_ PENELITIAN_yanti-kusnadi-IRMAN_R..pdf, diakses tanggal 10 April 2012. Guenther, E., 2006, Minyak Atsiri, Jilid I, diterjemahkan oleh Ketaren S., UI Press, Jakarta, pp.131-140. Gupta, C., Amar P.G., Ramesh C.U., and Archana, K., Comparative Analysis of the Antimicrobial Activity of Cinnamon Oil and Cinnamon Extract on Somefood-borne Microbes, AJMR, 2 (9), 247-251.


52

Hadipoentyanti E., dan Sri W., 2008, Keseragaman Selasih (Ocimum Spp.) Berdasarkan Karakter Morfologi, Produksi dan Mutu Herba, Jurnal Littri, 14 (4), 141-148. Hariana, H. A., 2008, Tumbuhan Obat dan Khasiatnya 2, Penebar Swadaya, Jakarta, pp. 26-27. Hasyim, N., Faradiba, dan Gina, A.B., 2011, Formulasi Gel Sari Buah Belimbing Wuluh (Averrhoa bilimbi L.), Majalan Farmasi dan Farmakologi, 15 (1), pp. 5-9. Jacknin, J., 2001, Smart Medicine for Your Skin: A Comprehensive Guide to Understanding Conventional and Alternative Therapies to Heal Common Skin Problems, Penguin Putnam Inc, New York, p 137. Jawetz, E. J. I., Melnick and Adelberg, E.A., 1996, Mikrobiologi Kedokteran, Edisi 20, diterjemahkan oleh Nugroho, E., dan Maulany, EGC, Jakarta, pp. 234-240. Kardinan, A., 2005, Mengenal Lebih Dekat Selasih Tanaman Keramat Multimanfaat, Agromedia Pustaka, Jakarta, pp. 17-20. Kardinan, A., 2005, Tanaman Penghasil Minyak Atsiri, Agromedia Pustaka, Jakarta, pp.1. Kartesz, J.T., 2013, Ocimum basilicum L. Sweet Basil, http://plants.usda.gov/core/profile?symbol=OCBA, diakses pada 30 Juli 2013. Khare, C.P., 2004, Indian Herbal Remedies, Springer, Germany, pp 334-336. Lertsatitthanakorn P., and Bhuddhipong S., 2012, Antibacterial Activity of an Effective Spice Essential Oil Formulated in Foot Deodorant Gel against Bacillus subtilis, J. Biol. Sci., 1-6. Leyner, M. dan Goldberg, B., 2006, Why Do Men Fall Asleep After Sex?, Random House, Inc., New York, pp. 176. Mars, B., 2007, The Desktop Guide to Hebral Medicine: The Ultimate Multidiciplinary Reference to the Amazing Realm of Healing Plants, in a Quick-study, One-stop Guide, Basic Helath Publications, Inc., Laguna Beach. Maryati, Ratna, S.F., Triastuti, R., 2007, Uji Aktivitas Antibakteri Minyak Atsiri Daun Kemangi (Ocimum basilicum L.) Terhadap Staphylococcus aureus dan Eschericia coli, Jurnal Penelitian Sains & Teknologi, Volume 8, No.1, 30-38. McGuire, K., 2012, Holy Basil, Ocimum sanctum, http://earthfairysdream. vpweb.com/2012/09/10/Matera-Medica-Holy-Basil-OCIMUM-sanctum. aspx, diakses tanggal 17 Mei 2013. McKane, L., and J. Kandel, 1996, Microbology: Essentials and Applications, Mc Graw Hill Inc., New York, pp. 396-398. Pommerville, J. C., 2011, Fundamentals of Microbiology, 10th edition, Jones and Bartlett Learning, Burlington, p 427.


53

Prabowo, Agus, Aniska, C.S., Annisa, G.I., Deasy R.N., Dwi, R.A., Istianah, 2012, Laporan SGD 3 Blok 6 LBM 4 “Dental, Head, Neck”, http://www.scribd.com/doc/90533819/Laporan-Sgd-3-Blok-6-Lbm-4, diakses pada 20 April 2012. Putriyanti, D., dkk, 2009, 100% Cantik Rahasia di Balik Buah & Sayur, Best Publisher, Jakarta, pp. 45. Radji, M., 2010, Buku Ajar Mikrobiologi Panduan Mahasiswa Farmasi dan Kedokteran, EGC, Jakarta. Ratner, B.D., 2004, Biomaterials Science: an Introduction to Materials in Medicine, 2nd ed., Elsevier Academic Press, London, pp. 104-105. Robinson, T., 1995, The Organic Constituens of Higher Plants, 6th edition, diterjemahkan oleh Padmawinata, Kosasih, hal 134, ITB, Bandung. Sastroamidjojo, S., 2001, Obat Asli Indonesia, edisi 6, Dian Rakyat, Jakarta, pp. 141. Seidemann, J., 2005, World Spice Plants, Springer-Verlag Berlin Heidelberg, New York, p 256. Steenis, C.G.G.J van, 1975, Buku Acuan Flora untuk Sekolah di Indonesia, PT. Pradnya Pramita, Jakarta, pp. 35-37, 63-67, 354-355, 359-360. Syahbana, R., 2010, Sukses Memproduksi Minyak Atsiri, Agromedia Pustaka, Jakarta, pp. 2. Tierno, P. M., 2001, The Secret Life of Germs: Observations and Lessons from a Microbe Hunter, Pocket Books, New York, pp 58-59. Toller, S. van and G. H. Dodd, 1992, Fragrance The Psychology and Biology of Perfume, Elsevier Science Publishers Ltd, England, pp. 74. Toselli, L., 2005, A Complete Guide to Manicure and Pedicure, diterjemahkan oleh Elviere, Maria, hal. 90, PT Gramedia Pustaka Utama, Jakarta. Troy, D.B., 2006, Remington: The Science and Practice of Pharmacy, 21st ed., Lippincott Williams and Wilkins, Philadelphia, pp. 770-771. Tyler, B., R. L., Robbers, S. J., 1988, Pharmacognosy, 9th edition, Lean Febiger, pp. 103-126. Varcoe, J.S., 2001, Clinical Biochemistry: Techniques and Instrumentation: A Practicak Course, World Scientific Publishing, London, p. 14-21. Voigt, R., 1995, Lehrbruch der Pharmazeutischen Tecnologie, diterjemahkan oleh Soewandhi, S.N. dan Widianto, M. B., hal. 141-142, Gadjah Mada University Press, Yogyakarta. Winarsih, S., Onggung, MH.N., dan Septiana, A.W., 2010, Uji Efektivitas Ekstrak Etanol Daun Selasih (Ocimum basilicum L.) Sebagai Antibakteri Terhadap Eschericia coli Secara In-Vitro, Jurnal Penelitian FKUB. Yuliani, S.H., 2005, Formulasi Gel Repelan Minyak Atsiri Tanaman Akar Wangi (Vetivera zizanioidesi (L) Nogh): Optimasi Komposisi Carbopol 3% b/vPropilenglikol, Majalah Farmasi Indonesia, 16 (4), 197-203.


LAMPIRAN

Lampiran 1. Pengesahan Surat Determinasi

54


Lampiran 2. Surat keterangan Staphylococcus epidermidis

55


Lampiran 3. Surat Keterangan Bacillus subtilis

56


57

Lampiran 4. Data rendemen destilat minyak atsiri daun kemangi Percobaan Replikasi 1 Replikasi 2 Replikasi 3

Berat daun kemangi segar (g) 3500 1000 1000 Rata-rata SD

Volume destilat (ml) 6,8 2,6 2,5

Rendemen (% v/b) 0,19 0,26 0,25 0,23 0,038

Lampiran 5. Data karakterisasi minyak atsiri daun kemangi A. Pengujian organoleptis minyak atsiri daun kemangi Pemeriksaan Hasil Bau Aromatik Warna Kuning muda kemerahan Kejernihan Jernih B. Penetapan indeks bias minyak atsiri daun kemangi Indeks bias Replikasi = Nt + 0,0003 (t-20ºC) 1 = Nt + 0,0003 (28ºC - 20ºC) 2 = Nt + 0,0003 (8) 3 4 = Nt + 0,0024

Nt 1,480 1,480 1,478 1,480 Rata-rata ± SD

Indeks Bias 1,4824 1,4824 1,4804 1,4824 1,4819 ± 0,001

C. Penetapan bobot jenis minyak atsiri daun kemangi Bobot piknometer (g) Bobot piknometer + air (g) Bobot air (g) ρ air (25ºC) (g/ml) Volume air (ml)

Bobot piknometer (g) Bobot piknometer + minyak kemangi (g) Bobot minyak kemangi (g) Volume minyak (air) (ml) ρ minyak kemangi (g/ml)

Replikasi 1 24,2790 34,4741 10,1951 0,99707 10,2251

Replikasi 2 24,7270 34,8620 10,1350 0,99707 10,1648

Replikasi 3 24,3400 34,5110 10,1710 0,99707 10,2009

Replikasi 1 24,2519 33,3159

Replikasi 2 24,7044 33,7479

Replikasi 3 24,3440 33,3932

9,0640 10,2251 0,8864

9,0435 10,1648 0,8897

9,0492 10,2009 0,8871

Rata-rata ± SD ρ minyak kemangi

= 0,8877 ± 0,00174 gram/mL


58

Lampiran 6. Uji Daya Antibakteri Minyak Atsiri Daun Kemangi terhadap Staphylococcus epidermidis Konsentrasi (%) 2,5 5 10 15 20 50 100 Kontrol pelarut (etanol 96%)

Diameter zona antibakteri (mm) 𝝌 ± SD Diameter zona Replikasi 1 Replikasi 2 Replikasi 3 hambat (mm) 4 4 4 4,0 ± 0,0 7 8 8 7,7 ± 0,6 12 12 11 11,7 ± 0,6 15 13 13 13,7 ± 1,2 15 12 9 12,0 ± 3,0 12 11 12 11,7 ± 0,6 9 11 11 10,3 ± 1,2 0 0 0 0

Kontrol pertumbuhan bakteri S. epidermidis

Kontrol sterilitas media


59

Lampiran 7. Uji Daya Antibakteri Minyak Atsiri Daun Kemangi terhadap Bacillus subtilis Konsentrasi (%) 2,5 5 10 15 20 50 100 Kontrol pelarut (etanol 96%)

Diameter zona antibakteri (mm) 𝝌 ± SD Diameter zona Replikasi 1 Replikasi 2 Replikasi 3 hambat (mm) 9 10 8 9,0 ± 1,0 10 8 11 9,7 ± 1,6 11 10 9 10,0 ± 1,0 12 13 12 12,3 ± 1,0 13 12 10 11,7 ± 1,5 12 12 12 12,0 ± 0,0 10 11 10 10,3 ± 0,6 0 0 0 0

Kontrol pertumbuhan bakteri B. subtilis


60

Lampiran 8. Penentuan Nilai KHM dan KBM Staphylococcus epidermidis dan Bacillus subtilis

Kontrol sterilisasi media

B. subtilis konsentrasi 1,5%


B. subtilis konsentrasi 1%





S. epidermidis konsentrasi 1%


S. epidermidis konsentrasi 1,5%

Kontrol pertumbuhan bakteri B. subtilis





61


62

Konsentrasi minyak atsiri 2% terhadap B. subtilis (KHM) S. epidermidis konsentrasi 4%

Kontrol pertumbuhan bakteri S. epidermidis

Konsentrasi minyak atsiri 2% terhadap S. epidermidis (KHM)

Konsentrasi minyak atsiri 2,5% terhadap S. epidermidis (KBM)

Konsentrasi minyak atsiri 2,5% terhadap B. subtilis (KBM)


Lampiran 9. Sediaan Gel Anti Bau Kaki Minyak Atsiri Daun Kemangi

Replikasi I

Replikasi III

Replikasi II

Basis Gel

63


64

Lampiran 10. Uji aktivitas antibakteri gel anti bau kaki minyak atsiri daun kemangi

Hasil pengukuran diameter zona hambat terhadap Staphylococcus epidermidis Replikasi I

Replikasi

Replikasi

(mm)

II (mm)

III (mm)

Kontrol (-) etanol 96%

0

0

0

0

Sediaan gel

12

13

13

12,7 ± 0,6

Minyak atsiri 15%

11

9

13

11,0 ± 2,0

Kontrol basis gel

0

3

0

1,0 ± 1,7


29

25

29

27,7 ± 2,3

𝝌 ± SD (mm)

Bahan

Hasil pengukuran diameter zona hambat terhadap B. subtilis Replikasi I

Replikasi

Replikasi

(mm)

II (mm)

III (mm)

Kontrol (-) etanol 96%

0

0

0

0

Sediaan gel

12

12

10

11,3 ± 1,2

Minyak atsiri 15%

9

13

11

11,0 ± 2,0

Kontrol basis gel

0

0

0

0


17

17

18

17,3 ± 0,6

𝝌 ± SD (mm)

Bahan


65

Uji daya antibakteri sediaan gel anti bau pada kaki terhadap S. epidermidis

Uji daya antibakteri sediaan gel minyak atsiri daun kemangi terhadap B. subtilis Keterangan nomor: (1) Minyak atsiri daun kemangi konsentrasi 15%; (2) Sediaan gel replikasi I; (3) Sediaan gel replikasi II; (4) Sediaan gel replikasi III; (5) Kontrol basis gel; (6) Kontrol negatif [pelarut etanol 96%]; (7) Kontrol positif [Clyndamicin sulphate 1,2%].


66

Lampiran 11. Pengukuran pH Sediaan Gel Anti Bau Kaki Minyak Atsiri Daun Kemangi Replikasi I II III 𝝌 ± SD

Kontrol Basis Gel 6 6 6 6±0

Gel Anti Bau Kaki 6 6 6 6±0

Lampiran 12. Pengukuran Uji Sifat Fisik Sediaan Gel Minyak Atsiri Daun Kemangi a. Viskositas Replikasi I II III 𝝌 ± SD

Kontrol Basis Gel (dPa.s) 260 300 250 270 ± 26,5

Gel Anti Bau Kaki (dPa.s) 250 245 250 248,3 ± 2,8

Kontrol Basis Gel (cm) 4,3 4 4,4 4,2 ± 0,2

Gel Anti Bau Kaki (cm) 4,8 4,3 5,2 4,8 ± 0,5

b. Daya Sebar Replikasi I II III 𝝌 ± SD

Lampiran 13. Hasil perhitungan-perhitungan statistik - Kenormalan diameter zona hambat Staphylococcus epidermidis a. Konsentrasi 2,5%


b. Konsentrasi 5%

c. Konsentrasi 10%

d. Konsentrasi 15%

e. Konsentrasi 20%

f. Konsentrasi 50%

g. Konsentrasi 100%

h. Kontrol (-) i. Uji Kruskal-Wallis

67


-

Post hoc 2,5% dan 5%

-

2,5% dan 10%

-

2,5% dan 15%

-

2,5% dan 20%

-

2,5% dan 50%

-

2,5% dan 100%

-

2,5% dan Kontrol (-)

68


-

5% dan 10%

-

5% dan 15%

-

5% dan 20%

-

5% dan 50%

-

5% dan 100%

-

5% dan K (-)

-

10% dan 15%

69


-

10% dan 20%

-

10% dan 50%

-

10% dan 100%

-

10% dan K(-)

-

15% dan 20%

-

15% dan 50%

-

15% dan 100%

70


-

15% dan K(-)

-

20% dan 50%

-

20% dan 100%

-

20% dan K(-)

-

50% dan 100%

-

50% dan K(-)

-

100% dan K(-)

71


-

Kenormalan data zona hambat gel minyak kemangi terhadap Staphylococcus epidermidis a. Kontrol (-) b. Sediaan gel

c. Minyak atsiri 15%

d. Kontrol basis gel

e. Kontrol (+)

f. Kruskal-Wallis



Post hoc test Kontrol (-) dan sediaan gel



Kontrol (-) dan minyak atsiri 15%

72




Kontrol (-) dan kontrol basis gel



Kontrol (-) dan kontrol (+)



Sediaan gel dan minyak atsiri 15%



Sediaan gel dan kontrol basis gel



Sediaan gel dan kontrol (+)



Minyak atsiri 15% dan kontrol basis gel



Minyak atsiri 15% dan kontrol (+)

73




-

Kontrol basis gel dan kontrol (+)

Gel dan minyak 15%

- Kenormalan data diameter zona hambat Bacillus subtilis a. Konsentrasi 2,5%

b. Konsentrasi 5%

c. Konsentrasi 10%

d. Konsentrasi 15%

74


e. Konsentrasi 20%

f. Konsentrasi 50% g. Konsentrasi 100%

h. Kontrol (-) i. Uji Kruskal-Wallis

-

2,5% dan 5%

-

2,5% dan 10%

75


-

2,5% dan 15%

-

2,5% dan 20%

-

2,5% dan 50%

-

2,5% dan 100%

-

2,5% dan K(-)

76


-

5% dan 10%

-

5% dan 15%

-

5% dan 20%

-

5% dan 50%

-

5% dan 100%

77


-

5% dan K(-)

-

10% dan 15%

-

10% dan 20%

-

10% dan 50%

-

10% dan 100%

78


-

10% dan K(-)

-

15% dan 20%

-

15% dan 50%

-

15% dan 100%

-

15% dan K(-)

79


-

20% dan 50%

-

20% dan 100%

-

20% dan K(-)

-

50% dan 100%

-

50% dan K(-)

80


81

-

100% dan K(-)

-

Kenormalan zona hambat gel minyak kemangi terhadap Bacillus subtilis a. Kontrol (-) b. Sediaan gel

c. Minyak atsiri 15%

d. Kontrol basis gel

e. Kontrol (+)

f. Kruskal-Wallis




Post hoc tes Kontrol (-) dan sediaan gel



Kontrol (-) dan minyak atsiri 15%



Kontrol (-) dan kontrol basis gel



Kontrol (-) dan kontrol (+)



Sediaan gel dan minyak atsiri 15%



Sediaan gel dan kontrol basis gel



Sediaan gel dan kontrol (+)

82




Minyak atsiri 15% dan kontrol basis gel



Minyak atsiri 15% dan kontrol (+)



Kontrol basis gel dan kontrol (+)

j. Statistik uji fisik gel minyak atsiri Viskositas

83


Daya sebar

84


85

BIOGRAFI PENULIS

Marsela Lotjita Parahita. Penulis lahir pada tanggal 30 Oktober 1991 di Pringsewu, Lampung, merupakan anak ketiga dari pasangan suami-istri Ignatius Sukasworo (Alm.) dan Caecilia Sartini. Penulis memiliki dua kakak perempuan bernama Melania Chrisma Widyawarantini dan Agatha Piscesia Paskalin; dan satu adik perempuan Theresia Galuh Wandita. Penulis telah menempuh pendidikan di TK Xaverius Pringsewu tahun 1995-1997, SD Fransiskus Asisi tahun 1997-2003, SMP Xaverius Pringsewu tahun 2003-2006, SMA Xaverius Pringsewu tahun 2006-2009, dan kuliah di Fakultas Farmasi Universitas Sanata Dharma Yogyakarta pada tahun 2009 sampai dengan tahun 2013. Selama menjadi mahasiswa penulis menjadi koordinator sie konsumsi panitia paskah tahun 2010, sie DDU panitia PPnEC tahun 2010, dan sie humas panitia PP tahun 2011. Penulis mendapatkan pengalaman sebagai asisten praktikum Farmasi Fisika dan praktikum Biofarmasetika pada tahun 2013.

PLAGIAT MERUPAKAN TINDAKAN TIDAK TERPUJI PLAGIAT

Recommend Documents